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【目的】通过体外细胞实验初步论证升陷汤不同剂量组对人肺腺癌A549细胞生长及增殖的效应,并选择复制人肺腺癌细胞A549移植瘤裸鼠模型作为研究对象,进一步研究升陷汤不同给药剂量对肺腺癌生长抑制率之间的量效关系及影响效应相关的部分生物学因子,从而拓宽升陷汤的临床应用范围,为中药复方干预肺腺癌提供实验依据。【方法】1.升陷汤含药血清干预人肺腺癌细胞A549增殖的研究:选择A549肺腺癌细胞株,培养人肺腺癌A549细胞系,采用血清药理学方法,制备SD大鼠含药血清,用MTT法检测各组细胞生长及增殖情况。2.升陷汤干预肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长的研究:于裸鼠右腋窝靠近背侧部位的皮下接种0.2ml人肺腺癌A549细胞悬液,其浓度为1x10~6/ml,构建A549裸鼠移植瘤模型。观察肿瘤细胞生长的增殖的情况,当为肉眼可见瘤体时即造模成功。通过病理切片观察组织形态评价模型的有效性。并将造模成功25只裸鼠随机分为5组,每组5只。组别为:空白对照组(MG)、顺铂(DDP)组、升陷汤高剂量组(SXT-H)、升陷汤中剂量组(SXT-M)、升陷汤低剂量组(SXT-L)。观察当皮下肿物的平均直径达到约5mm时,随即开始给药。连续给药21天后解剖取瘤。绘制移植瘤裸鼠体重变化曲线、移植瘤生长曲线,计算各组药物对移植瘤的抑制率,并通过HE染色观察裸鼠移植瘤的病理学情况。3.升陷汤干预肺腺癌移植瘤裸鼠肺、脾组织情况及其与调节血清TNF-α、HIF-1α的关系:上述模型连续给药21天后取裸鼠肺、脾组织,制作石蜡切片,通过HE染色观察肺、脾脏的病理学情况;并用ELISA法检测裸鼠血清中TNF-α及HIF-1α的情况,探究升陷汤干预肺腺癌的相关生物学效应。【结果】(1)通过MTT法检测显示:升陷汤含药血清对人肺腺癌细胞A549增殖具有明显的抑制作用,含药血清高、中、低剂量组分别对人肺腺癌A549细胞24h、48h、72h增殖作用得出抑制率,即:24h SXT-H、SXT-M、SXT-L各组A549细胞的抑制率分别为16.37%,13.61%,5.35%;48h抑制率分别为27.23%,24.44%,15.94%;72h抑制率分别为35.01%,30.98%,24.69%。因此,升陷汤含药血清对肺腺癌细胞增殖的抑制率与时间和剂量均成正相关性,即随着时间推移,浓度越高,抑制率越高。(2)人肺腺癌A549移植瘤裸鼠模型构建成功,成瘤率为100%。移植瘤均位于裸鼠的右腋窝靠近背侧部位的皮下处,可扪及小米粒样突起状肿物,移植瘤肉眼可见小结节,质地较硬,瘤体形状规则,边界清楚,活动度较差,包膜较完整,少部分会有粘连。取材时观察到,瘤体呈鱼肉样红色,质地较为坚硬。取移植瘤组织HE染色植瘤组织HE染色镜下均可查见肿瘤细胞生长旺盛,肿瘤细胞排列较为密集,部分胞质内含圆形脂滴,细胞间可见多个嗜碱性渗出点,细胞核大小不一,异型性较小,核仁明显,病理性核分裂相可见,未见明显变性坏死区域。通过对升陷汤高、中、低剂量组裸鼠增殖作用得出抑制率,表中可以观察到:随着时间的推移,顺铂组对A549裸鼠移植瘤抑制率逐渐升高,且抑瘤率分别为9.17%、23.15%、35.48%、38.63%、42.47%、53.57%和57.36%;相比顺铂组而言,升陷汤高、中低剂量组也随时间的推移抑制率逐渐增强,相对同一时间顺铂组对裸鼠移植瘤抑制率较弱;升陷汤各剂量组中,升陷汤中剂量组对裸鼠移植瘤抑制要优于升陷汤高剂量和升陷汤低剂量组,而升陷汤高剂量组优于升陷汤低剂量组。结果显示,升陷汤对裸鼠移植瘤具有抑制作用,且抑制率与时间成正相关性,也就是说随着时间推移,抑制率越高,升陷汤中剂量效应优于其他剂量组。(3)升陷汤干预肺腺癌移植瘤裸鼠的肺、脾组织HE染色未查见肿瘤,与模型组相比,顺铂组,升陷汤高、中剂量组移植瘤裸鼠血清中HIF-1α水平明显降低,有统计学意义(P<0.01),升陷汤低剂量组有下降趋势,但无统计学意义;与顺铂组相比,升陷汤高剂量组与低剂量组A549移植瘤裸鼠血清中HIF-1α水平差异明显,升陷汤中剂量组无明显差异。结果显示,升陷汤高中低剂量组对模型裸鼠HIF-1α有抑制作用,其中升陷汤中剂量抑制效应比较明显。与模型组相比,顺铂组、升陷汤高、中剂量组的A549移植瘤裸鼠血清TNF-α明显降低,有统计学意义(P<0.01或者P<0.05),升陷汤低剂量组有下降趋势,但无统计学意义;与顺铂组相比,升陷汤高剂量组与低剂量组的A549移植瘤裸鼠血清TNF-α水平差异明显,升陷汤中剂量组无明显差异。结果显示,升陷汤高、中、低剂量组对人肺腺癌细胞A549移植瘤裸鼠血清TNF-α有抑制作用,其中升陷汤中剂量抑制效应比较明显。【结论】升陷汤能够有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长和增殖,其效应可能与其降低模型裸鼠血清中TNF-α和HIF-1α水平,影响肺腺癌低氧微环境,诱导肿瘤细胞坏死,可能是阻延肺腺癌发生发展的作用机制之一。