糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种常见的内分泌代谢性疾病，以高血糖代谢为特征，持续高血糖带来氧化应激增加，引起各种慢性并发症。近年来糖尿病发病率逐年上升，据WHO估计，目前全世界糖尿病患者总数已超过1.2亿，1995年我国糖尿病普查显示我国成人糖尿病患病率达2.55％，已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的重大流行病之一。因此寻找治疗糖尿病新药，尤其是开发对糖尿病引起的并发症有显著疗效的天然药物，已经为世界各国所瞩目，目前已发现不少有降血糖活性的天然药物，在筛选其活性成分，探讨其作用机理上取得了较大进展。 桑科(Moraceae)植物桑(Morus alba L.)的干燥叶—桑叶(Folium Mori Albae，Mulberry leaf)，又名铁扇子、蚕叶。全国大部分地区均产。主要在夏秋两季采摘收集。民间用于治疗感冒、下肢象皮肿、化脓性中耳炎等。现代药理研究表明，它有抗菌、抗肿瘤、扩张心血管、降胆固醇及促进细胞生长、植物雌激素等作用，水煎剂有降血糖效应。其主要化学成分包括甾体及三萜类化合物、香豆精化合物、黄酮类化合物等。近年天然黄酮类化合物降血糖活性逐渐成为研究热点之一。在本研究开始之前，经检索尚未发现有文献报道桑叶中黄酮类成分的降血糖作用。为进一步提取桑叶活性成分，探讨其可能的降糖机制，本实验提取桑叶总黄酮(MTF)，并就其对糖尿病大鼠双糖酶、抗氧化酶及糖基化作用的影响进行了观察。 方法 1 桑叶总黄酮的提取与鉴定 桑叶用70％乙醇加热回流石油醚脱脂法提取，分别用水和PBS配制成0.8g(生药)／ml。 盐酸-镁粉试验、硝酸铝络合反应、薄层层析紫外检视，三方面定性。芦丁对照标准曲线法定量测定桑叶中总黄酮含量。 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 2 桑叶总黄酮的药理试验 2．IMTF对糖尿病大鼠血糖的影响 选取SD大鼠，四氧啼唆诱导糖尿病模型，分4组给药4周：＊）模型对照组，NS Zml／d，（2）阳性对照组，阿卡波糖 20 mg／kg体重，mMTF低剂量组，水配制 MTF sg （生药）／kg体重，mMTF高剂量组，MTP16g／kg体重；另设正常大鼠组，MTF sg／kg 体重。测定大鼠给药前后禁食 12h血浆葡萄糖浓度（FPG）。 给药后对实验大鼠进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT，2．5 g／kg体重），测定给 糖后门、90、150）min血糖浓度，绘制时间一血糖 OGTT曲线。 2．2 MTF对大鼠双糖酶的影响 双糖酶抑制试验，剥离糖尿病大鼠小肠刷状缘膜，匀浆后加 PBS配制的（麦芽 糖、蔗糖、乳糖）糖液，实验组加 MTF［0．sing（生药）几、4刀m叭、8刀mg／L］、对 照组加PSS，反应一定时间后测定葡萄糖产物浓度，计算相对抑制率；麦芽糖注入 试验，人鼠麻醉下开腹，自十二指肠日侧注入 20％麦芽糖 PBS溶液，之后第 30min、 60min、120min同时采l」、外周静脉血，测定血糖浓度，计算门一外周静脉血糖差 变化。 二．3 MTF对抗氧化酶的影响 按试剂盒方法测定各组大鼠给药前后血浆GSH－PX、SOD活性：大鼠给药后处 死，制备肝、脾组织匀浆，测定给药后肝、脾组织GSH－PX、SOD活性。 2．4 MTF对蛋白糖基化的影响 NBT法测定给药前后血浆果糖胺浓度；体外糖基化系统（PBS中含 BSA 40叭、 葡萄糖 200mmol几）中分别加 PBS配制的 MTF［0．0019（MTF）几、0．of g／L、0．1 。口及Y白（PBS）和二甲以肌（25mmol／L），各培育0、l、4、7、14、ZI、28d， 测定早期糖化蛋白的生成量。 3 大鼠肾脏的病理学检查 人鼠给药后处死，取肾脏，制备石蜡切片，光镜检查。 结果 桑叶提取物经鉴定含有黄酮类化合物，总黄酮平均含量：33．87 mg／g。 FPG，给药后MTF高、低剂量组分别降低9．50mmol几和8石3mmol几，低于给 药前和模型组（P＜0刀1人与阳性药组无显著差异，＊＊卜两剂量组间无显著差异卯 ＞o刀5）。0＊TT曲线，＊v两组均显著低于模型组（卜＜0刀5），给糖后与正常组 无明显差异：acarbose组各时点血糖均值低于模型组但差异不显著，高于正常组0 ＜0刀5）：＊＊F组在给糖后90mi＜与acarboSS组有显著差异（P＜0刀S），其余时点 无显关性差异；＊＊卜两组间无显著性差异。 ·二· 浙江大学硕土学位论文 中文摘要 MTF对小肠刷状缘膜蔗糖酶、麦芽糖酶、乳糖酶抑制率依次达 68刀％、47．l?