【摘 要】
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背景和目的多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）常见于育龄期妇女,是一种内分泌及代谢紊乱综合征。临床表现为肥胖、月经稀少、痤疮、高雄激素血症和多囊卵巢改变等。其并发症表现形式多样,主要包括胰岛素抵抗和代谢综合征。近年来的病因学和基础研究证据发现,肥胖和慢性低度炎症在PCOS的发生发展中起着重要的作用,并且肥胖和炎症二者之间存在相互影响。氧化型低密度脂蛋白（o
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背景和目的多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）常见于育龄期妇女,是一种内分泌及代谢紊乱综合征。临床表现为肥胖、月经稀少、痤疮、高雄激素血症和多囊卵巢改变等。其并发症表现形式多样,主要包括胰岛素抵抗和代谢综合征。近年来的病因学和基础研究证据发现,肥胖和慢性低度炎症在PCOS的发生发展中起着重要的作用,并且肥胖和炎症二者之间存在相互影响。氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）,并非由基因编码,而是低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）在体内,被自由基、强氧化物等氧化所得产物。作为脂质代谢的重要环节,ox-LDL的产生与心血管疾病、糖尿病等代谢性疾病的发生发展密切相关。PCOS有长期并发症的风险,如心血管疾病和糖尿病风险。研究发现在PCOS患者中,血清和卵泡液中ox-LDL水平明显升高。此外,ox-LDL可以作为危险信号,激活内皮细胞中炎症小体途径。ox-LDL与PCOS慢性低度炎症的关系越来越受到重视。因此,本研究旨在探索PCOS患者颗粒细胞中炎症小体相关因子的异常表达,以及ox-LDL对炎症小体相关因子的影响及作用机制,为PCOS的临床治疗提供更多的靶点及思路。方法一、采用生物信息学分析技术,筛选PCOS组与正常对照组颗粒细胞差异表达基因①从基因表达公共数据库下载数据集GSE34526,包括7个PCOS样本和3个非PCOS样本颗粒细胞基因表达芯片数据,进行数据分析;②使用R语言limma包分析PCOS和对照组间差异表达基因（筛选条件:|log2 fold-change（FC）|＞1,P＜0.05）;③将步骤②筛选出的差异表达基因进行富集分析,包括基因本体论（Gene Ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）信号通路分析;④对于炎症小体相关基因进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,使用Cytoscape插件CytoHubba不同算法,计算贡献度;⑤提取差异表达基因中炎症小体相关基因表达情况;⑥提取差异表达基因中脂质代谢相关基因表达情况。二、通过临床样本及体外细胞实验研究PCOS患者ox-LDL水平与颗粒细胞中炎症小体相关因子表达的相关性以及调控方式①临床样本纳入单纯输卵管因素不孕症患者及PCOS患者共60例,分为正常体重组（BMI＜24 kg/m2）和超重组（BMI≥24 kg/m2）,检测卵泡液ox-LDL水平,卵巢颗粒细胞炎症小体相关因子表达;②使用ox--LDL处理KGN细胞,研究炎症小体相关因子表达水平,检测KGN细胞凋亡水平,探究ox-LDL对细胞炎症状态的影响。结果1.生物信息学分析:GSE34526中,PCOS患者中炎症小体相关基因、脂质代谢相关基因表达水平升高;2.在正常及超重组,PCOS患者卵泡液中ox-LDL水平升高,颗粒细胞中炎症小体相关因子NLRP3、Caspase-1、IL-18的mRNA、蛋白质水平显著高于对照组;3.体外细胞实验表明,ox-LDL激活KGN细胞NLRP3/Caspase-1/IL-18炎症小体信号通路,并且细胞早期凋亡率明显升高（10.85±1.179%vs 3.267±0.4477%,P=0.0005）。结论1.生物信息学数据显示,PCOS患者颗粒细胞差异表达基因主要富集于炎症和脂质代谢。2.PCOS患者卵泡液中ox-LDL水平升高;颗粒细胞中NLRP3、IL-18、Caspase-1表达水平升高。3.ox-LDL激活KGN细胞NLRP3/IL-18/Caspase-1通路,细胞凋亡水平上升。
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