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多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是常见的生殖内分泌疾病之一,影响大约4-20%的育龄妇女,常表现为不孕和内分泌代谢紊乱,发病机制仍不明确。我国人口众多,PCOS患者数量庞大且有年轻化趋势。由于其广泛的患病率以及对育龄女性造成的严重内分泌损害,PCOS成为了近年来女性不孕的主要原因。迄今为止尚无完全治愈PCOS的治疗手段。卵巢功能异常及与之相关的内分泌代谢紊乱是PCOS的主要病理机制。卵巢内颗粒细胞的主要功能是产生性激素包括卵泡刺激素、雌二醇及睾酮等,研究认为卵巢内颗粒细胞的改变可能是PCOS患者内分泌改变的一个内在机制。因此,探究PCOS颗粒细胞功能失调的发病机制,有助于寻找PCOS新的诊断方法和治疗方法,也是目前生殖领域的研究热点。众多研究发现甲基化修饰可能参与PCOS颗粒细胞的病理生理改变。人类甲基转移酶样蛋白（human methytransferase like proteins,METTLs）是甲基化修饰的重要相关因子,其特征是具有甲基化反应的共底物S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine,SAM）结合域。该蛋白质家族的成员均被证实或预测为DNA、RNA或蛋白质甲基转移酶。最新研究报道METTLs家族的甲基转移酶作用可能参与配子发生相关的生物生殖过程。人类甲基转移酶样蛋白7B（human methytransferase like protein 7B,METTL7B）作为METTLs家族成员之一,关于其研究进展鲜有报道,其具体生物学功能目前尚不清楚。近期有文献报道METTL7B含有与其他甲基化酶共有的SAM结合位点结构域,提示其可能具有潜在甲基化酶活性。为了明确PCOS患者颗粒细胞中差异蛋白表达状况,我们首先进行了PCOS组患者和对照组患者颗粒细胞蛋白质谱分析,筛选差异蛋白,发现METTL7B蛋白在PCOS组患者颗粒细胞中高表达。那么METTL7B蛋白是否与PCOS颗粒细胞的生物功能有关?颗粒细胞的线粒体功能是与PCOS疾病发生和发展密切相关的关键环节。线粒体转化激活剂51（mitochondrial translational activator 51,MSS51）是一种核基因编码的线粒体翻译激活因子。文献证实MSS51基因的失活会导致线粒体形态和功能的异常,进一步影响氧化呼吸链,导致线粒体供能障碍。动物实验中研究表明MSS51表达异常可能造成小鼠骨骼肌线粒体DNA拷贝数和线粒体形态异常,参与脂肪酸氧化、糖酵解和氧化磷酸化等生物过程,并很可能与葡萄糖代谢或者胰岛素水平相关,引起内分泌异常。本研究在体外KGN细胞系中过表达METTL7B后RNA测序（RNA sequencing,RNA-seq）,筛选差异基因发现MSS51表达降低。进一步通过生物信息学分析预测发现MSS51与METTL7B有潜在结合位点。那么,METTL7B是否通过MSS51参与颗粒细胞功能的调控?这些问题都需要研究证实。目的:验证蛋白质谱结果,分析筛选差异表达蛋白;进一步检测METTL7B在PCOS患者颗粒细胞中的定位和表达,研究METTL7B与PCOS颗粒细胞功能的相关性;分析RNA-seq测序结果筛选差异基因;检测MSS51在PCOS患者颗粒细胞中的表达;体外细胞学实验验证RNA-seq测序结果,探究METTL7B与MSS51的相互关系。初步探索METTL7B与MSS51在PCOS患者颗粒细胞功能失调过程中的作用机制,为诊断和治疗PCOS提供新的靶点及理论依据。方法:1.选取3例PCOS组患者颗粒细胞与3例对照组患者颗粒细胞进行蛋白质谱分析,筛选差异表达蛋白;蛋白印迹法（Western Blot）验证蛋白质谱结果。2.采用实时逆转录荧光定量PCR（Reverse transcription quantitative real-time PCR,q RT-PCR）、Western Blot及免疫荧光技术,检测METTL7B在PCOS组及对照组患者颗粒细胞中的定位和表达;采用免疫组化技术,检测METTL7B在PCOS组及对照组患者卵巢组织中的定位和表达。3.KGN细胞中过表达METTL7B后RNA-seq测序,分析测序结果筛选出差异基因。4.采用qRT-PCR和Western Blot检测MSS51在PCOS组及对照组患者颗粒细胞中的表达;使用METTL7B的过表达载体（oe-METTL7B）,si RNA（si-METTL7B）以及对应的阴性对照（negative control,NC）转染KGN细胞,q RT-PCR和Western Blot检测METTL7B对MSS51的调控作用。结果:1.蛋白质谱结果显示:与对照组相比,PCOS组有329个蛋白表达上调,328个蛋白表达下调,选取3个表达差异蛋白（AFP、LDH、YY1）验证其表达与测序结果一致。2.METTL7B mRNA及蛋白在PCOS组患者颗粒细胞和卵巢组织中的表达均增高（P＜0.05）;METTL7B蛋白在颗粒细胞和卵巢组织中均有定位,主要定位于颗粒细胞的细胞质中。3.RNA-seq测序结果显示:与对照组相比,METTL7B过表达组有39个mRNAs表达上调,48个mRNAs表达下调,其中MSS51 mRNA下调。4.MSS51 mRNA及蛋白在PCOS组患者颗粒细胞中的表达降低（P＜0.05）。KGN细胞系中抑制METTL7B后,MSS51 mRNA及蛋白表达量显著增高（P＜0.01,P＜0.001）;过表达METTL7B后MSS51 mRNA及蛋白表达量表达量显著降低（P＜0.001,P＜0.01）。结论:1.METTL7B在PCOS患者颗粒细胞中有定位且表达增加,提示METTL7B可能参与PCOS患者颗粒细胞的功能。2.MSS51在过表达METTL7B的KGN细胞和PCOS患者颗粒细胞中表达均降低,且METTL7B与MSS51基因表达负相关,提示METTL7B可能通过MSS51参与PCOS颗粒细胞功能失调的调控。