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肝纤维化是对酒精滥用、药物毒性、病毒感染等多种因素引起的慢性损伤的修复反应。其特点是肝脏中结缔组织非典型增生,引起肝间质中不断沉积细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）。肝纤维化是一种多因素疾病,目前尚未完全阐明其确切的发病机制。根据中医的理论,肝纤维化的病机以血瘀为主,肝络郁阻。桂枝茯苓丸（Guizhi Fuling Pills,GZFL）是由五种中草药组成的中药方剂,具有活血、化瘀、消癥的作用。为评价GZFL的抗肝纤维化疗效,本课题以乙醛刺激的LX-2细胞和四氯化碳（Carbon tetrachloride,CCl4）诱导的小鼠肝纤维化模型为实验对象,探讨GZFL延缓肝纤维化进程的作用机制,为抗肝纤维化的中医药研究提供依据。实验方法:（1）体外实验采用乙醛刺激LX-2细胞进一步活化,使用GZFL或秋水仙碱对其进行处理。通过CCK-8法测定LX-2细胞的活力;利用倒置显微镜观察细胞的形态变化;AO/EB染色、Hoechst 33342/PI染色初步观察细胞凋亡情况;采用荧光探针JC-1检测细胞的线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）变化;Western blot法检测细胞中α-SMA、Col-I、CUGBP1蛋白的表达,以及线粒体凋亡途径和TGF-β/Smads信号转导通路中关键蛋白的表达。（2）体内实验中将雄性ICR小鼠60只分成对照组（n=12）和造模组（n=48）,对照组小鼠接受腹腔内注射生理盐水,造模组通过20%CCl4经腹腔注射以诱导建立肝纤维化模型。成模后将小鼠分为模型组、秋水仙碱组（0.1 mg/kg）、GZFL低剂量组（125 mg/kg）和GZFL高剂量组（250 mg/kg）,每日给予相应剂量的GZFL或秋水仙碱灌胃治疗。给药4周后,处死小鼠并采集小鼠血清、肝脏、空肠和结肠样本。对小鼠体重变化、脏器指数进行分析;HE染色、Masson染色、Sirius Red染色观察小鼠肝脏的病理变化和胶原组织沉积情况;透射电镜对肝脏进行超微结构观察;检测小鼠血清中与肝功能相关的部分生化指标;测定肝脏中羟脯氨酸含量及抗氧化指标;并使用ELISA试剂盒检测肝脏中肝纤四项和细胞因子水平;定量RT-PCR检测α-SMA、CUGBP1、TGF-BR2、Smad1、Smad2、Smad7 等 mRNA 的表达;Western blot法和免疫组织化学法检测肝脏中α-SMA、Col-I、CUGBP1、线粒体凋亡途径和TGF-β/Smads信号转导通路关键蛋白的表达;通过HE染色观察小鼠空肠与结肠的组织学变化;通过16S rRNA基因测序,对小鼠粪便中的肠道菌群进行分析。实验结果:（1）体外实验发现GZFL浓度为10 mg/mL时,可以明显抑制LX-2细胞的增殖,抑制率为79.47±7.40%,IC50值为8.48 mg/mL。倒置显微镜、AO/EB染色、Hoechst 33342/PI染色结果显示,经GZFL处理后LX-2细胞出现了形态皱缩变圆,核固缩等变化,且LX-2细胞的MMP显著下降。Western blot结果显示GZFL可调节LX-2细胞中α-SMA、Col-I、CUGBP1、线粒体凋亡途径和TGF-β/Smads信号通路关键蛋白的表达。（2）小鼠体内实验发现GZFL能降低小鼠脏器指数和肝纤四项的水平,增加小鼠体重,改善小鼠肝脏形态结构、胶原沉积、肝功能受损、抗氧化系统失衡和炎症等情况。qRT-PCR 结果显示,经 GZFL 作用后 α-SMA、CUGBP1 以及 TGF-BR2、Smad1和Smad2的mRNA表达均下降,Smad7 mRNA表达升高。Western blot和免疫组织化学结果显示,GZFL 能下调 α-SMA、Col-I、CUGBP1、TGF-β1、TGF-BR2、p-Smad2、p-Smad3、Bax、Caspase-3、Caspase-9 等蛋白表达,同时上调 Smad7 和 Bcl-2 蛋白表达。（3）GZFL干预后可部分恢复空肠、结肠的病理变化,改善肝纤维化小鼠肠道菌群的群落结构和多样性,增加拟杆菌门/厚壁菌门比值,在门、纲、科、属水平上一定程度逆转由CCl4引起的小鼠肠道微生物群失调;且GZFL作用后增加了小鼠结肠中紧密连接蛋白（ZO-1,Claudin1和Occludin）的表达。实验结论:（1）GZFL可调节LX-2的增殖、凋亡和激活。（2）GZFL对CCl4诱导的肝纤维化模型小鼠起到了改善肝功能、抑制胶原蛋白生成、抑制炎症及减少氧化应激的作用。GZFL可调节LX-2细胞和小鼠肝脏TGF-β/Smads信号通路和线粒体凋亡途径相关蛋白的表达,提示GZFL可能是通过调节TGF-β/Smads信号通路和线粒体凋亡途径实现的抗肝纤维化。（3）GZFL对肝纤维化模型小鼠的肠道菌群多样性和菌群结构具有调节作用,可增加结肠紧密连接蛋白的表达,使肠道通透性降低,可通过“肠-肝轴”调节肠道菌群以改善肝纤维化。