论文部分内容阅读
目的：研究白细胞介素21(IL-21)对外周血来源CIK细胞抗白血病的作用及其作用机制。方法：采集分离正常人的外周血单个核细胞,加用细胞因子诱导培养CIK细胞,在IL-21作用下,MTT法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用；流式直接免疫标记法检测CIK细胞表面IL-21受体(IL-21R)的表达；半定量RT-PCR法检测CIK细胞IFN-γ、TNF-α、 TNF-β、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、FasL和NKG2D mRNA的表达；流式直接免疫标记法检测CIK细胞表面、perforin, FasL、NKG2D及细胞内TNF-β的表达；酶联免疫法检测培养上清中IFN-γ、TNF-α的表达；免疫沉淀和Western-blot的方法检测JAK-STAT细胞信号途径的变化。结果：在IL-21作用下,培养14天时,(1)细胞数量的扩增无明显变化。(2)CIK细胞对K562细胞的杀伤作用与未加细胞因子组相比明显提高,但随着时间的延长杀伤作用逐渐减弱。(3)CIK细胞表面IL-21R的表达明显增加约2倍。(4)CIK细胞IFN-γ mRNA的表达由(0.5103±0.2358)升至(0.7705±0.2493)穿孔素mRNA的表达量由(0.7592±0.1457)升至(0.9831±0.1265),颗粒酶BmRNA的表达量由(0.4768±0.1589)升至(0.7319±0.1639),FasL mRNA的表达量由(0.4608±0.2842)升至(0.7381±0.2568),TNF-β mRNA的表达量为(0.5993±0.1865),与对照mRNA的表达(0.5688±0.1849)差别不大,NKG2D mRNA的表达为(0.6321±0.1586),与对照mRNA的表达(0.6042±0.1268)差别不大。(5)培养上清中IFN-γ和TNF α的表达(6)CIK细胞表面FasL的表达为(0.19%),与未加IL-21组(0.09%)相比明显增加,perforin,NKG2D的表达和细胞内TNF-β的表达无明显差异。(7)Western-blot结果显示STAT1, STAT3和STAT5信号途径的活化对CIK细胞具有重要的作用。结论：人源IL-21可增强外周血来源CIK细胞抗白血病作用,此作用是通过增加其受体的表达,增加穿孔素、颗粒酶B. FasL和IFN-γ的表达而实现的,而且JAK-STAT细胞信号途径也参与了此种作用。提示IL-21在增强白血病免疫治疗中具有潜在的临床应用前景。