论文部分内容阅读
研究目的：1.探讨原发性高血压(essential hypertension,EH)与炎症因子相关的circRNAs之间的关联性。
2.探讨circRNAs与性别、吸烟、饮酒、BMI等因素以及与其对应miRNAs之间的关系。
3.初步探讨circRNA-miRNA网络调控对原发性高血压的作用，为原发性高血压的预防、治疗提供理论依据。
研究方法：1.以年龄和性别为匹配因素，选取200例宁波市汉族常住居民进行1∶1匹配的病例对照研究，其中原发性高血压100例，正常对照100例。通过统一的问卷调查、体格检查和实验室检查，收集研究对象的基线数据、血液样本及血生化指标。
2.提取研究对象全血样本和内皮细胞中的总RNA，反转录成cDNA，通过实时荧光定量PCR技术检测研究对象中hsa_circ_0037911、hsa_circ_0002161及对应的hsa-miR-637的表达量。
3.采用单因素分析方法及非条件logistic回归分析目标circRNAs、miRNA的相对表达量和影响因素与原发性高血压的关联。利用ROC曲线评价circRNAs、miRNAs及其与吸烟、BMI的联合作用在原发性高血压中的诊断价值分析。
研究结果：1.全基因组芯片分析：共有287条表达差异的circRNAs，其中209条上调，78条下调。
2.非条件logistic回归分析：（1）hsa_circ_0037911：与对照组相比，病例组的hsa_circ_003791的表达量上调（病例vs.对照：8.30±1.97vs.8.95±1.18，P=0.005）；不同性别（男性vs.女性：9.14±1.48vs.8.09±1.66，P＜0.05）、是否吸烟（吸烟vs.不吸烟：9.09±1.81vs.8.47±1.57，P=0.021）组间差异具有统计学意义。在女性、年龄≥60y、不吸烟、不喝酒、BMI≥25的亚组中，病例中表达量上调，其?Ct值呈现保护效应，OR值(95%CI)分别为0.493(0.300,0.812)、0.701(0.519,0.947)、0.553(0.386,0.793)、0.609(0.432,0.859)和0.392(0.196,0.786)；
（2）hsa_circ_0002161：不同性别（男性vs.女性：5.45±1.94vs.6.17±1.84，P=0.008）、是否吸烟（吸烟vs.不吸烟：5.31±2.33vs.5.96±1.74，P=0.039）以及是否饮酒（饮酒vs.不饮酒：5.09±2.42vs.6.04±1.67，P=0.003）组间差异具有统计学意义。在以女性、年龄＜60y和BMI＜25为亚组的人群中，病例为高表达，其?Ct值呈现出保护效应，对应的OR值(95%CI)分别为0.834(0.701,0.993)、0.687(0.474,0.997)、0.852(0.726,1.000)；
（3）hsa-miR-637：在不同年龄（＜60y vs.≥60y：1.15±1.63vs.1.68±1.19，P=0.012）组间差异有统计学意义。在以男性、年龄＜60y、吸烟、饮酒和BMI≥25为亚组的人群中，在病例组中低表达，其?Ct值呈现出危险效应，对应的OR(95%CI)分别为1.448(1.006,2.082)、2.306(1.028,5.173)、3.167(1.005,9.973)、3.452(1.176,10.134)、2.040(1.035,4.018)。
（4）BMI呈现危险效应（OR）(95%CI)为1.166(1.032,1.316),adjusted P=0.013，即BMI每增加一个单位，原发性高血压发生的风险增加1.166倍。
（5）吸烟呈现危险效应OR(95%CI)为6.455(1.990,20.934),adjusted P=0.002，即吸烟行为每增加一个数值单位，原发性高血压发生的风险增加6.455倍。
3.目标circRNAs与对应的miRNA之间的相关性分析：（1）hsa_circ_0037911和hsa-miR-637的表达量之间存在正相关关系（r=0.15，P=0.04）,而hsa_circ_0002161和hsa-miR-637的表达量之间并未发现明显的相关关系（r=0.01，P=0.84）。
（2）hsa_circ_0037911与hsa-miR-637病例组（r=0.19，P=0.05）、男性组中（r=0.35，P=0.0003）、吸烟组中（r=0.50，P=0.0002）、饮酒组中（r=0.02，P=0.0009）以及BMI大于25分组中（r=0.22，P=0.03）呈现正相关关系，在年龄小于60岁分组中呈现负相关关系（r=0.27，P=0.04）。
4.ROC曲线分析：（1）hsa_circ_0037911对原发性高血压中的诊断价值作用有统计学意义，曲线下面积（area under curve，AUC）=0.627，P＜0.005,而hsa_circ_0002161和hsa-miR-637的表达量差异不具有统计学意义。
（2）目标RNAs与BMI、吸烟联合作用在对原发性高血压中的诊断价值作用分析：hsa_circ_0037911、hsa_circ_0002161和hsa-miR-637与BMI、吸烟联合作用均有统计学意义（hsa_circ_0037911：AUC=0.714，P＜0.005；hsa_circ_0002161：AUC=0.666，P＜0.005；hsa-miR-637：AUC=0.665，P＜0.005）。以上三条联合曲线下面积均比单条目标RNAs的曲线下面积大，预测结果更好。
5.目标RNAs在细胞中的验证结果：（1）hsa_circ_0037911：在人主动脉内皮细胞（HumanAortic Endothelial Cells，HAECs）中，hsa_circ_0037911在TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h组中差异有统计学意义，且在处理组中表达量呈现上调现象，仅在TNF-α1μmol/L，24h组中差异没有统计学意义；在人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs）中，在TNF-α1μmol/L，24h、TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h四组差异均存在统计学意义，且表达量呈现上调现象；
（2）hsa_circ_0002161：在人主动脉内皮细胞中，hsa_circ_0002161在TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h组中差异有统计学意义，且在处理组中表达量呈现上调现象，仅在TNF-α1μmol/L，24h组中差异没有统计学意义；在人脐静脉内皮细胞中，hsa_circ_0002161在TNF-α1μmol/L，24h、TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h四组差异均有统计学意义，且表达量呈现上调现象；
（3）hsa-miR-637：人主动脉内皮细胞中，仅在TNF-α1μmol/L，48h和TNF-α10μmol/L，48h两组中差异有统计学意义，且表达量呈现下调现象；人脐静脉内皮细胞中，除了在TNF-α1μmol/L，24h组中差异不存在统计学意义，在剩余三组的差异具有统计学意义，表达量呈现下调现象。
研究结论：1.炎症相关的hsa_circ_0037911和hsa_circ_0002161在人体和内皮细胞内高表达是原发性高血压的危险因素，二者对应的hsa-miR-637在人体内高表达是原发性高血压发病的保护因素。
2.不同因素分层后，目标RNAs对疾病的效应也会随之改变。与全体研究对象的效应相比，亚组中hsa_circ_0037911的危险作用减弱，在女性、年龄＜60y和BMI＜25人群中hsa_circ_0002161呈现不同程度的危险作用，而hsa-miR-637在男性、年龄＜60y、吸烟、饮酒和BMI≥25人群中呈现不同程度的保护作用。
3.hsa_circ_0037911和hsa_circ_0002161在原发性高血压中具有诊断价值，且多因素联合后作用增强，具有一定的临床意义。
2.探讨circRNAs与性别、吸烟、饮酒、BMI等因素以及与其对应miRNAs之间的关系。
3.初步探讨circRNA-miRNA网络调控对原发性高血压的作用，为原发性高血压的预防、治疗提供理论依据。
研究方法：1.以年龄和性别为匹配因素，选取200例宁波市汉族常住居民进行1∶1匹配的病例对照研究，其中原发性高血压100例，正常对照100例。通过统一的问卷调查、体格检查和实验室检查，收集研究对象的基线数据、血液样本及血生化指标。
2.提取研究对象全血样本和内皮细胞中的总RNA，反转录成cDNA，通过实时荧光定量PCR技术检测研究对象中hsa_circ_0037911、hsa_circ_0002161及对应的hsa-miR-637的表达量。
3.采用单因素分析方法及非条件logistic回归分析目标circRNAs、miRNA的相对表达量和影响因素与原发性高血压的关联。利用ROC曲线评价circRNAs、miRNAs及其与吸烟、BMI的联合作用在原发性高血压中的诊断价值分析。
研究结果：1.全基因组芯片分析：共有287条表达差异的circRNAs，其中209条上调，78条下调。
2.非条件logistic回归分析：（1）hsa_circ_0037911：与对照组相比，病例组的hsa_circ_003791的表达量上调（病例vs.对照：8.30±1.97vs.8.95±1.18，P=0.005）；不同性别（男性vs.女性：9.14±1.48vs.8.09±1.66，P＜0.05）、是否吸烟（吸烟vs.不吸烟：9.09±1.81vs.8.47±1.57，P=0.021）组间差异具有统计学意义。在女性、年龄≥60y、不吸烟、不喝酒、BMI≥25的亚组中，病例中表达量上调，其?Ct值呈现保护效应，OR值(95%CI)分别为0.493(0.300,0.812)、0.701(0.519,0.947)、0.553(0.386,0.793)、0.609(0.432,0.859)和0.392(0.196,0.786)；
（2）hsa_circ_0002161：不同性别（男性vs.女性：5.45±1.94vs.6.17±1.84，P=0.008）、是否吸烟（吸烟vs.不吸烟：5.31±2.33vs.5.96±1.74，P=0.039）以及是否饮酒（饮酒vs.不饮酒：5.09±2.42vs.6.04±1.67，P=0.003）组间差异具有统计学意义。在以女性、年龄＜60y和BMI＜25为亚组的人群中，病例为高表达，其?Ct值呈现出保护效应，对应的OR值(95%CI)分别为0.834(0.701,0.993)、0.687(0.474,0.997)、0.852(0.726,1.000)；
（3）hsa-miR-637：在不同年龄（＜60y vs.≥60y：1.15±1.63vs.1.68±1.19，P=0.012）组间差异有统计学意义。在以男性、年龄＜60y、吸烟、饮酒和BMI≥25为亚组的人群中，在病例组中低表达，其?Ct值呈现出危险效应，对应的OR(95%CI)分别为1.448(1.006,2.082)、2.306(1.028,5.173)、3.167(1.005,9.973)、3.452(1.176,10.134)、2.040(1.035,4.018)。
（4）BMI呈现危险效应（OR）(95%CI)为1.166(1.032,1.316),adjusted P=0.013，即BMI每增加一个单位，原发性高血压发生的风险增加1.166倍。
（5）吸烟呈现危险效应OR(95%CI)为6.455(1.990,20.934),adjusted P=0.002，即吸烟行为每增加一个数值单位，原发性高血压发生的风险增加6.455倍。
3.目标circRNAs与对应的miRNA之间的相关性分析：（1）hsa_circ_0037911和hsa-miR-637的表达量之间存在正相关关系（r=0.15，P=0.04）,而hsa_circ_0002161和hsa-miR-637的表达量之间并未发现明显的相关关系（r=0.01，P=0.84）。
（2）hsa_circ_0037911与hsa-miR-637病例组（r=0.19，P=0.05）、男性组中（r=0.35，P=0.0003）、吸烟组中（r=0.50，P=0.0002）、饮酒组中（r=0.02，P=0.0009）以及BMI大于25分组中（r=0.22，P=0.03）呈现正相关关系，在年龄小于60岁分组中呈现负相关关系（r=0.27，P=0.04）。
4.ROC曲线分析：（1）hsa_circ_0037911对原发性高血压中的诊断价值作用有统计学意义，曲线下面积（area under curve，AUC）=0.627，P＜0.005,而hsa_circ_0002161和hsa-miR-637的表达量差异不具有统计学意义。
（2）目标RNAs与BMI、吸烟联合作用在对原发性高血压中的诊断价值作用分析：hsa_circ_0037911、hsa_circ_0002161和hsa-miR-637与BMI、吸烟联合作用均有统计学意义（hsa_circ_0037911：AUC=0.714，P＜0.005；hsa_circ_0002161：AUC=0.666，P＜0.005；hsa-miR-637：AUC=0.665，P＜0.005）。以上三条联合曲线下面积均比单条目标RNAs的曲线下面积大，预测结果更好。
5.目标RNAs在细胞中的验证结果：（1）hsa_circ_0037911：在人主动脉内皮细胞（HumanAortic Endothelial Cells，HAECs）中，hsa_circ_0037911在TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h组中差异有统计学意义，且在处理组中表达量呈现上调现象，仅在TNF-α1μmol/L，24h组中差异没有统计学意义；在人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs）中，在TNF-α1μmol/L，24h、TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h四组差异均存在统计学意义，且表达量呈现上调现象；
（2）hsa_circ_0002161：在人主动脉内皮细胞中，hsa_circ_0002161在TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h组中差异有统计学意义，且在处理组中表达量呈现上调现象，仅在TNF-α1μmol/L，24h组中差异没有统计学意义；在人脐静脉内皮细胞中，hsa_circ_0002161在TNF-α1μmol/L，24h、TNF-α1μmol/L，48h、TNF-α10μmol/L，24h、TNF-α10μmol/L，48h四组差异均有统计学意义，且表达量呈现上调现象；
（3）hsa-miR-637：人主动脉内皮细胞中，仅在TNF-α1μmol/L，48h和TNF-α10μmol/L，48h两组中差异有统计学意义，且表达量呈现下调现象；人脐静脉内皮细胞中，除了在TNF-α1μmol/L，24h组中差异不存在统计学意义，在剩余三组的差异具有统计学意义，表达量呈现下调现象。
研究结论：1.炎症相关的hsa_circ_0037911和hsa_circ_0002161在人体和内皮细胞内高表达是原发性高血压的危险因素，二者对应的hsa-miR-637在人体内高表达是原发性高血压发病的保护因素。
2.不同因素分层后，目标RNAs对疾病的效应也会随之改变。与全体研究对象的效应相比，亚组中hsa_circ_0037911的危险作用减弱，在女性、年龄＜60y和BMI＜25人群中hsa_circ_0002161呈现不同程度的危险作用，而hsa-miR-637在男性、年龄＜60y、吸烟、饮酒和BMI≥25人群中呈现不同程度的保护作用。
3.hsa_circ_0037911和hsa_circ_0002161在原发性高血压中具有诊断价值，且多因素联合后作用增强，具有一定的临床意义。