【摘 要】
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本研究用Ca2+荧光探针Fura-2/AM测定了受精诱导的牛卵母细胞胞质游离Ca2+浓度变化，并用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM对胞质游离Ca2+在卵母细胞内的空间分布进行了观察，以认识Ca2+对牛卵母细胞的成熟和早期胚胎发育的调控作用。卵母细胞体外成熟培养时间、不同浓度咖啡因预处理解冻精液、精子不同的获能时间对体外受精胚卵裂率的影响的研究表明，牛卵母细胞成熟培养22小时进行体外受精，在含20
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本研究用Ca2+荧光探针Fura-2/AM测定了受精诱导的牛卵母细胞胞质游离Ca2+浓度变化，并用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM对胞质游离Ca2+在卵母细胞内的空间分布进行了观察，以认识Ca2+对牛卵母细胞的成熟和早期胚胎发育的调控作用。
卵母细胞体外成熟培养时间、不同浓度咖啡因预处理解冻精液、精子不同的获能时间对体外受精胚卵裂率的影响的研究表明，牛卵母细胞成熟培养22小时进行体外受精，在含20mg/mlBSA及8μl/ml肝素钠BO液的基础上添加10mM的咖啡因，精子在体外获能5小时，卵裂率可达到65.4％。
根据牛体外受精胚细胞核的形态变化，确定牛受精卵在体外发育培养15小时即可发育到原核期。
研究表明，MⅡ期卵母细胞的游离Ca2+的浓度为84.99nmol/L；在含钙培养液中培养0小时、2小时、胚胎原核期、2-细胞期，胞质游离Ca2+的浓度分别为120.05nmol/L、229.09nmol/L、108.73nmol/L和111.17nmol/L。在无钙培养液中培养2小时，胞质游离Ca2+的浓度为41.92nmol/L，受精卵未能形成原核。MⅡ期卵母细胞内Ca2+分布于卵质内，荧光强度较弱，Ca2+浓度较低；受精后Ca2+集中分布于质膜下卵皮质区，2小时后，荧光强度明显增强，Ca2+浓度增加，且向卵中央扩展；发育到原核期和2-细胞期时，Ca2+均匀分布于整个细胞的胞质内。研究结果表明，牛卵母细胞的成熟和早期胚胎的发育与Ca2+密切相关，而且是Ca2+依赖性的。
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