目的：卵巢癌是严重威胁妇女健康的常见恶性肿瘤，死亡率在女性生殖器官恶性肿瘤中占第1位。卵巢癌的治疗以手术和化疗为主，由于其起病隐匿，早期筛查困难，大约2/3的患者在初诊时就已发生盆腹腔内的广泛种植。近年来，虽然随着肿瘤细胞减灭术的不断改善，以及以铂类为基础联合化疗的广泛应用，使80%的初治患者获得临床缓解。但是，随之发生的早期复发、化疗耐药令多年来卵巢癌的疗效并无显著改善。卵巢癌对铂类化疗药物的耐药是影响化疗效果，造成肿瘤复发、转移及死亡率高居不下的重要原因。因此，寻找新的、有效的治疗药物，阐明其作用机制，在卵巢癌的治疗中显得愈发重要而迫切，成为国内外妇科肿瘤学界密切关注的研究热点。诺斯卡品(noscapine)，又名那可丁，是一种来自于罂粟属鸦片的苄基异喹啉类生物碱。过去几十年被用作镇咳药,近些年国内外研究发现诺斯卡品能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。研究发现，诺斯卡品及其衍生物抗肿瘤活性高，毒副作用不明显，对复发及耐药的肿瘤细胞均有抑制作用。本实验主要研究诺斯卡品对人卵巢癌顺铂耐药株SKOV3/DDP(卵巢浆液性乳头状囊腺癌顺铂耐药株)的作用，并通过测定凋亡相关蛋白Bcl2和Bax蛋白的表达情况，进一步研究诺斯卡品诱导凋亡的作用机制。方法：体外培养人卵巢癌顺铂耐药株SKOV3/DDP，以同一浓度种植于96孔板，将诺斯卡品分为8个浓度(0.625，1.25，2.5，5，10，20，40，80μmol/L)作用于SKOV3/DDP细胞，并分24h、48h、72h三个时间段，用MTT比色法检测细胞的增殖情况，并采用SPSS13.0软件包进行数据分析，使用log拟合算出IC50及IC10。不同浓度的顺铂(1，2，4，8，16μg/mL)单用及联合2.5μmol/L的诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞48h后，用MTT比色法检测细胞的增殖情况，并采用SPSS13.0软件包进行数据分析，使用log拟合算出IC50。顺铂(4μg/ml)和诺斯卡品(2.5μmol/L)单用和两种药物联合作用于耐药SKOV3/DDP细胞48h后，用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化，收集细胞制成单细胞悬液，用70%酒精固定，用流式细胞仪分别检测细胞凋亡、Bcl2和Bax蛋白的表达水平。数据处理用SPSSl3.0统计学软件完成，各组计量资料数据以平均值±标准差(Mean±SD)方式表达，多组间比较采用单因素方差分析(OneWay ANOVA)，组间比较采用LSD-t检验。以P=0.05为标准，P<0.05为差异显著有统计学意义。结果：1诺斯卡品对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用：8个浓度(0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80μmol／L)的诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞24h的细胞抑制率分别为1.33±0.42%、2.53±0.98%、5.21±1.25%、15.26±0.85%、22.21±2.73%、29.14±1.62%、37.33±3.48%、63.23±2.27%，作于用SKOV3/DDP细胞48h细胞的抑制率分别为1.21±0.38%、3.71±0.65%、7.89±1.23%、18.32±1.13%、25.97±1.18%、36.52±3.51%、63.47±3.55%、72.12±2.85%，作用于SKOV3/DDP细胞72h细胞的抑制率分别为2.17±0.43%、4.85±1.21%、9.78±1.55%、22.16±2.46%、31.54±3.17%、41.63±4.92%、69.53±2.12%、78.72±2.96%，2.5μmol／L以上各组之间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。随着药物浓度的增高及药物作用时间的延长，SKOV3/DDP细胞抑制率均呈上升趋势。2顺铂及其联合诺斯卡品对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用：1、2、4、8、16μg／mL5个浓度组的顺铂，作用于SKOV3/DDP细胞48h细胞的抑制率分别为10.45±1.21%、17.89±1.01%、25.77±1.56%、34.46±1.45%、52.23±1.33%，各浓度组顺铂联合2.5μmol／L诺斯卡品作于用SKOV3/DDP细胞48h细胞的抑制率分别为13.79±1.38%、25.76±1.17%、32.24±1.40%、45.16±1.34%、64.36±1.96%，顺铂联合诺斯卡品后的细胞抑制率明显高于顺铂单用组，且差异有统计学意义(P<0.05)。3SKOV3/DDP细胞的形态学观察：单用诺斯卡品(2.5μmol／L)和顺铂(4μg／ml)及联合应用作用于SKOV3/DDP细胞48h后，在倒置相差显微镜下观察，对照组的细胞排布紧密，贴壁生长，细胞呈梭形或多角形，胞浆透明，折光性强，细胞核隐约可见，生长状态良好。诺斯卡品作用后细胞形态及生长情况无明显变化。顺铂作用后可见部分细胞间接触减少,小部分细胞变圆，失去贴壁生长形态，脱落悬浮于培养基中。诺斯卡品和顺铂联合作用后，细胞的形态变化较单用顺铂组明显，可见细胞间接触减少，部分细胞变圆、皱缩、破裂，脱落呈悬浮状。4流式细胞仪检测SKOV3/DDP细胞的凋亡率：对照组细胞48h凋亡率为：1.67±0.68%。4μg／ml顺铂作用于细胞48h后凋亡率为：8.12±0.89%。2.5μmol／L诺斯卡品作用于细胞48h后凋亡率为：2.96±0.84%。2.5μmol／L诺斯卡品联合4μg／ml顺铂作用于细胞48h后凋亡率为：15.56±0.43%。实验表明，诺斯卡品单独作用于SKOV3/DDP细胞后的凋亡率与对照组无明显差异，顺铂组及顺铂联合诺斯卡品组凋亡率与对照组的差异有统计学意义，其中诺斯卡品联合顺铂组的凋亡率明显高于其它实验组，差异有统计学意义(P<0.05)。5流式细胞分析技术检测Bcl2和Bax蛋白的表达情况：⑴4μg／mL顺铂作用于SKOV3/DDP细胞48h后，Bcl2和Bax的荧光指数(FI)为0.934±0.037、1.213±0.028，与对照组1.000±0.009、1.000±0.023相比差异有统计学意义(P<0.05)。⑵2.5μmol／L诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞48h后，Bcl2和Bax的荧光指数(FI)为0.995±0.024、1.039±0.016，与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。⑶4μg／mL顺铂联合2.5μmol／L诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞48h后，Bcl2和Bax的荧光指数(FI)为0.842±0.019、1.334±0.041，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结果显示，顺铂组及诺斯卡品联合顺铂组，Bcl2蛋白的荧光指数下降，Bax蛋白的荧光指数升高，联合组变化更明显。结论：1诺斯卡品单独用药在一定的浓度范围内能够抑制卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的增殖，并呈现时间和剂量依赖效应。2顺铂联合非细胞毒性药物浓度的诺斯卡品可以增加SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感度，诺斯卡品可作为一种理想的顺铂增敏剂。3诺斯卡品与顺铂有协同作用，可能通过降低Bcl2表达及升高Bax表达，下调Bcl2/Bax比值诱导凋亡，增强卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对顺铂的敏感性，诺斯卡品可作为卵巢癌耐药的新型化疗药物，其机制还有待于进一步研究。