【摘 要】
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目的利用RNA干扰技术沉默肝癌癌基因p28GANK观察其对肝癌细胞HepG2的影响,并探讨其机制。方法用腺病毒介导的RNA干扰技术下调p28GANK的表达,用细胞流式和TUNNEL分析细胞凋亡;
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目的利用RNA干扰技术沉默肝癌癌基因p28GANK观察其对肝癌细胞HepG2的影响,并探讨其机制。方法用腺病毒介导的RNA干扰技术下调p28GANK的表达,用细胞流式和TUNNEL分析细胞凋亡;Western Blot检测cleaved caspase-8, cleaved caspase-9, cleaved PARP, Bcl-2家族蛋白,细胞色素C,p53和MAPK家族的变化;JC-1检测线粒体膜电位(Δψm)的变化;DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)。结果下调p28GANK的表达可引发HepG2细胞的调亡,进一步的结果显示:(1)caspase-9被活化,其抑制剂Z-LEHD-FMK抑制细胞凋亡;(2)Bax/Bcl-XL比例升高,Bax向线粒体的移位,Δψm下降,细胞色素C释放,Δψm稳定剂BA可抑制其释放及细胞凋亡;(3)p53在线粒体和胞核内聚集,其转录活性升高;(4)p38MAPK被活化,其抑制剂SB203580抑制Bax、Bcl-XL、p53和Δψm的变化,并抑制细胞凋亡;(5)ROS增加,抗氧化剂NAC抑制p38MAPK磷酸化和细胞凋亡。结论p28GANK基因可以作为肝癌生物治疗的有效靶点。
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