转Bt基因玉米对亚洲玉米螟的抗性效应及机理研究

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本文以5个转Bt基因玉米品系G03-2396、G03-2739、G04-591、G04-676、W04-134和常规玉米苏玉16为试验材料,通过研究,筛选出了对亚洲玉米螟抗性效果明显的2个品系,并以这2个转Bt基因玉米品系为研究对象进一步探讨了其对该害虫的抗性效应及抗性机制。结果如下:抗性鉴定指出,G03-2396、G03-2739两个品系对亚洲玉米螟的抗性强,W04-134的抗性次之,G04-591、G04-676的抗性较弱。室内生测结果表明,G03-2396、G03-2739的心叶组织对亚洲玉米螟初孵幼虫和3龄幼虫的影响明显,但取食雌穗后的抗性不及心叶,尤其是对3龄幼虫的抗性较低,与对照比差异不显著。取食这两个转基因材料心叶组织后,亚洲玉米螟幼虫的后续虫态也受到一定影响,与对照相比,其化蛹率、羽化率降低,蛹重下降,单雌产卵量减少。以G03-2396、G03-2739为试验材料,研究了其对亚洲玉米螟各龄幼虫实验种群消长动态的影响。结果表明,取食这两个试验材料的心叶组织后,1龄幼虫的寿命仅6天,2龄幼虫、3龄幼虫10天后几乎全部死亡,1至4龄幼虫或全部死亡不能化蛹,或平均蛹重与对照相比显著降低,只有5龄幼虫各测定指标与对照相比差异不显著。试验结果还发现,取食两个转Bt基因玉米心叶和雌穗后对存活幼虫羽化后的成虫寿命、单雌产卵量及卵的孵化也产生了一定的后续效应。研究结果同时指出,雌穗的抗性不及心叶,可能是雌穗组织中杀虫蛋白表达量较低,毒杀作用不强所致。通过对上述两种转Bt基因玉米材料对亚洲玉米螟幼虫生长发育和营养指标影响的进一步分析,发现3龄、5龄幼虫取食玉米心叶的死亡率较取食雌穗的高,虽然雌穗未对幼虫死亡率产生显著影响,但对各龄幼虫的体重影响明显。3龄幼虫取食两种转Bt基因玉米心叶3天和6天后,幼虫的取食与生长速率受到明显抑制,但对食物的利用与转化以及相对代谢速率的影响不明显;3龄幼虫取食两种转基因玉米雌穗6天后,其食物利用率及食物转化率极显著的低于对照;而5龄幼虫取食两种转Bt基因玉米雌穗3天后对各营养指标的影响较取食心叶的明显。采用酶联免疫生测法(ELISA)测定了两种转Bt基因玉米品系G03-2396、G03-2739组织器官中毒蛋白的表达量、亚洲玉米螟各龄幼虫体内及其粪便中毒蛋白的含量,发现:(1)转Bt基因玉米两种主要器官心叶和雌穗中均表达了一定量的Bt杀虫蛋白,但心叶组织中毒蛋白的表达量高于雌穗;(2)3龄幼虫取食心叶和雌穗后体内的毒蛋白含量较5龄幼虫的要高,且3龄幼虫取食心叶后的体内毒蛋白含量高于取食雌穗的;(3)3龄、5龄幼虫取食心叶后粪便中的毒蛋白含量较取食雌穗的要高,但取食不同器官的5龄幼虫粪便中毒蛋白含量又较3龄幼虫中的要高,只是差异不显著。通过测定亚洲玉米螟幼虫体内羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶两种解毒酶的活性,发现取食转Bt基因玉米心叶和雌穗3天后,3龄幼虫体内的羧酸酯酶活性受到明显抑制,且取食心叶后的抑制程度较取食雌穗的强;与3龄幼虫相比,亚洲玉米螟5龄幼虫取食转Bt基因玉米心叶和雌穗后,对体内羧酸酯酶活性的影响不明显。另外,取食转Bt基因玉米心叶组织后对亚洲玉米螟3龄幼虫体内谷胱甘肽-S-转移酶活性的影响显著,其余处理与对照相比差异均不显著。
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