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目的：研究支气管哮喘患者中性粒细胞内是否存在KLF2/RelA比例失衡及与中性粒细胞凋亡的关系方法：收集健康正常人及轻、中、重度哮喘患者外周血，通过FICOLL淋巴细胞分离液分离中性粒细胞，利用流式细胞术检测中性粒细胞凋亡率，利用RT-PCR和Western-blot分别检测KLF2、RelA和Bcl-xlmRNA和蛋白的表达，利用免疫荧光检测KLF2和RelA在细胞内的表达及定位。结果：1中性粒细胞的分离与纯度鉴定成功分离外周血中性粒细胞，经Wright-Giemsa染色鉴定后，中性粒细胞纯度达到95%以上；2哮喘患者中性粒细胞凋亡率变化健康对照组、轻、中、重度哮喘组中性粒细胞凋亡率（5.36±0.57、4.45±0.76、2.10±0.25、1.81±0.67）呈降低趋势，健康对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均存在统计学差异（P＜0.01），健康对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。3哮喘患者KLF2mRNA和蛋白表达变化及与凋亡的关系1）KLF2mRNA相对表达量：RT-PCR检测KLF2mRNA在各组的表达后发现轻、中、重度哮喘组（0.47±0.11、0.75±0.13、1.17±0.28）呈上升趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组与健康志愿者组（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），重度哮喘组与健康志愿者组（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）如表3，图3；2）KLF2蛋白相对表达量：Western-blot检测KLF2蛋白在各组的表达后发现轻、中、重度哮喘组KLF2蛋白相对表达量（0.050±0.014、0.066±0.025、0.091±0.023）呈增加趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.01），轻、中度哮喘组与健康志愿者（0.124±0.021）比较均减小，差异均有统计学意义（P＜0.01），重度哮喘组与健康志愿者组（1.52±0.37）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）如表3，图4；3）KLF2核/浆平均光密度值：免疫荧光检测KLF2在中性粒细胞内的表达及定位，采用Image-Pro Plus6.0检测核/浆平均光密度值发现轻、中、重度哮喘组KLF2核/浆平均光密度值（0.33±0.10、0.58±0.14、0.72±0.15）呈逐渐增加的趋势，轻度哮喘组和中度哮喘组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），中、重度哮喘组间比较差异差异也有统计学意义（P＜0.05），轻、中、重度哮喘与健康志愿者组（0.14±0.04）比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），如表3，图5；4）中性粒细胞凋亡率与KLF2蛋白表达做Pearson相关性分析（r=0.1208，P>0.05），提示无相关性；5）中性粒细胞凋亡率与中性粒细胞内KLF2核/浆平均吸光度值做Pearson相关性分析（r=-0.7754，P＜0.001），提示两者之间呈负相关。4哮喘患者RelAmRNA和蛋白表达变化及与凋亡的关系1）RelAmRNA相对表达：正常对照组、轻、中、重度哮喘组RelAmRNA相对表达量（0.08±0.07、1.11±0.44、2.33±0.56、2.65±0.44）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均存在统计学差异（P＜0.01），健康对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；2）RelA蛋白相对表达：对照组、轻、中、重度哮喘组RelA蛋白相对表达量（0.039±0.024、0.092±0.046、0.187±0.045、0.201±0.058）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均有存在统计学差异（P＜0.01），对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）,中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；3）RelA核/浆平均光密度值：正常对照组、轻、中、重度哮喘组RelA核/浆平均光密度值（0.09±0.04、0.28±0.13、0.63±0.26、0.74±0.24）呈上升趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均有存在统计学差异（P＜0.01），正常对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；4）中性粒细胞凋亡率与RelA蛋白表达做Pearson相关性分析（r=-0.8079，P＜0.001），提示两者间呈负关性；5）中性粒细胞凋亡率与中性粒细胞内RelA核/浆平均吸光度值做Pearson相关性分析（r=-0.7332，P＜0.001），提示两者之间呈负相关；5哮喘患者KLF2/RelA比例变化及与凋亡的关系1）KLF2/RelA蛋白比值：轻、中、重度哮喘组（9.8±4.4、2.7±1.3、7.8±2.9）较正常对照组（42.1±16.2）降低，差异均有统计学意义P＜0.01，轻、中、重度哮喘组间两两比较，差异无统计学意义（P>0.05）；2）KLF2/RelA蛋白比值与中性粒细胞凋亡凋亡做Pearson相关性分析（r=0.6689，P＜0.001），提示两者之间呈正相关；6哮喘患者Bcl-xl的表达变化正常对照组、轻、中、重度哮喘组Bcl-xl蛋白相对表达量（0.870±0.252、0.481±0.257、0.047±0.031、0.019±0.015）呈降低趋势，正常对照组、轻、中度哮喘组间两两比较，差异均有存在统计学差异（P＜0.01）,正常对照组、轻度哮喘组与重度哮喘组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）中度哮喘组与重度哮喘组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：1）哮喘患者中性粒细胞凋亡率随着哮喘严重程度的加重而下降；2）哮喘患者外周血中性粒细胞存在KLF2/RelA比例失衡，并且KLF2/RelA比例失衡可能是导致哮喘患者外周血中性粒细胞凋亡减少的机制。