【摘 要】
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目的:骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种具有向骨,软骨,脂肪等分化的干细胞。TES C基因在多种细胞中对增殖和分化有着重要的作用。本研究探索TESC在SD大鼠BMSCs成骨分化,细胞增殖和细胞凋亡等生物过程中的作用及机制。研究方法:1、qRT-PCR和Western blot检测TESC和成骨分化相关基因Runx2、OCN和OPN等在成骨诱导分化Od、14d时mRNA和蛋白水平的表达量,成骨诱导
【基金项目】
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《MiR-146b-5p调节大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的潜在机制研究》，编号:2021-MS-159，金额:5万人民币，辽宁省科技厅；
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目的:骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种具有向骨,软骨,脂肪等分化的干细胞。TES C基因在多种细胞中对增殖和分化有着重要的作用。本研究探索TESC在SD大鼠BMSCs成骨分化,细胞增殖和细胞凋亡等生物过程中的作用及机制。研究方法:1、qRT-PCR和Western blot检测TESC和成骨分化相关基因Runx2、OCN和OPN等在成骨诱导分化Od、14d时mRNA和蛋白水平的表达量,成骨诱导分化14d进行茜素红染色,成骨诱导分化7d行碱性磷酸酶染色。2、构建TESC敲低腺病毒载体,镜下观察腺病毒最佳转染浓度并在转染48小时后,qRT-PCR和Western blot检测TESC 在mRNA和蛋白水平的敲低效率。在成骨分化14d时,通过Western blot和qRT-PCR检测敲低TESC后Runx2、OCN和OPN的表达量变化。Western blot 检测 Wnt/β-catenin 通路相关蛋白 β-catenin、DKK-1 和CSK-3β的表达。敲减TESC后并成骨分化14d进行茜素红染色并半定量检测,7d行碱性磷酸酶染色及活性检测。3、CCK-8方法检测敲低TESC对SD大鼠BMSCs 在特定时段增殖的作用（24h、48h、72h）。流式检测仪检测敲低TESC对SD大鼠BMSCs凋亡的作用。结果:1、qRT-PCR和Western blot结果显示:成骨分化14d时TESC、Runx2、OCN和OPN在mRNA和蛋白水平均升高,具有统计学意义（P＜0.05）。茜素红染色外观及镜下胞质呈红色。碱性磷酸酶染色外观及镜下呈深蓝色。2、qRT-PCR和Western blot显示构建腺病毒可有效敲减TESC。成骨分化14d时,qRT-PCR和Western blot检测TESC敲低组成骨分化相关基因Runx2、OCN和OPN,结果显示在mRNA和蛋白水平的表达量均下降,具有统计学意义（P＜0.05）。成骨分化7d,碱性磷酸酶染色显示,TESC敲低组外观及镜下染色均较浅。行碱性磷酸酶活性检测发现TESC敲低组碱性磷酸酶活性下降,具有统计学意义（P＜0.05）。成骨分化14d时、茜素红染色显示TESC敲低组染色外观及镜下颜色偏浅且结节生成减少,半定量检测显示TESC敲低组矿化结节生成减少,具有统计学意义（P《0.05）。在成骨分化14d时,western blot检测Wnt通路指标蛋白CSK-3β和DKK-1 在TESC敲低组表达升高,而β-catenin 在TESC敲低组表达下降,具有统计学意义（P＜0.05）。3、CCK-8结果显示TESC敲低组BMSCs的OD值在24h、48和72下降,具有统计学意义（P＜0.05）。流式检测显示TESC敲低组BMSCs的细胞凋亡率更高且具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1、TESC在BMSCs成骨分化的过程中呈升高的趋势。2、敲低TESC可以通过wnt/β-catenin通路来抑制BMSCs成骨分化,降低矿化能力和碱性磷酸酶生成。3、敲低TESC可以抑制BMSCs细胞增殖,促进细胞凋亡。
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