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第一部分不同浓度氯胺酮-硫酸镁对大鼠离体缺血再灌注心脏心功能的影响目的:研究KMS对缺血再灌注损伤大鼠离体心脏心功能是否具有保护作用,以及保护作用与浓度变化之间的关系。方法:将80只成年雄性SD大鼠随机分成8组(n=10),即:NC组、IR组、KMS-LL组(氯胺酮(0.001mmol/L+硫酸镁(1.5mmol/L+IR组)、KMS-LH组(氯胺酮(0.001mmol/L+硫酸镁3.0mmol/L+IR组)、KMS-ML组(氯胺酮(0.01mmol/L+硫酸镁1.5mmol/L+IR组)、KMS-MH组(氯胺酮0.01mmol/L+硫酸镁3.0mmol/L+IR组)、KMS-HL组(氯胺酮0.1mmol/L+硫酸镁1.5mmol/L+IR组)和KMS-HH组(氯胺酮0.1mmol/L+硫酸镁3.0mmol/L+IR组)。采用大鼠离体心脏langendorff灌注模型,NC组用K-H液持续灌注190min; IR组用K-H液平衡灌注20min,续灌10min,全心缺血40min,再灌注120min,KMS组于缺血前及再灌注全程给含相应浓度氯胺酮和硫酸镁的K-H灌注,其余同IR组。记录各组平衡20min,缺血前,再灌注5、15、30、60、90、120min时的心率(HR),左心室发展压(LVDP),左心室舒张末期压(LVEDP),左心室压力上升和下降最大速率(±dp/dtmax),冠脉流量(CF)的变化,观察KMS对大鼠离体心肌缺血再灌注之后心功能的影响,并探讨此作用与二者浓度变化间的关系。结果: KMS各组与IR组比较,均可以减轻缺血再灌注损伤引起的心功能的下降,即:减轻IRI引起的HR、LVDP、±dp/dtmax、CF的下降,抑制LVEDP的上升。KMS-LL与HH组之间具有显著性差异(P<0.05)。结论: KMS对大鼠离体缺血再灌注损伤的心脏功能具有一定的保护作用。在本实验选择的浓度范围内,显示出浓度从小到大,保护作用有下降的趋势,低浓度氯胺酮0.001mmol/L+硫酸镁1.5mmol/L的心肌保护效果更好。第二部分大鼠心肌组织中NMDAR的表达目的:检测心肌组织中NMDAR的表达,探索心肌缺血再灌注损伤治疗的新途径。方法:取正常的雄性SD大鼠的左心室部心肌组织,用RT-PCR方法检测心肌中NMDAR1、NMDR2A及NMDAR2B mRNA的表达。结果:在大鼠左心室中,用RT-PCR方法检测检测到了NMDAR1 mRNA表达,而未见到NMDR2A、NMDAR2B的表达。结论:成年健康SD大鼠心脏组织存在NMDAR1表达,具体功能尚不清楚,推测其可能成为兴奋性物质作用的靶点,并在心肌缺血再灌注损伤中起一定的作用,心脏组织NMDAR的生物活性可能与NMDAR1-NMDAR1纯合型有关。NMDAR的抑制剂可能成为今后研究心肌保护药物的一种新的方向与策略。第三部分KMS对大鼠离体缺血再灌注心肌保护效应机制的实验研究目的:观察NMDA对大鼠离体心脏的损伤作用,以及KMS对NMDA和IR所致心肌损伤的保护机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分成5组(n=10),即:NC组、IR组、KMS(氯胺酮0.001mmol/L+硫酸镁1.5 mmol/L)组、NMDA组、KMS+NMDA(1mmol/L)组。采用离体心脏langendorff灌注模型,观察各组心功能,冠脉流出液中LDH、CK活性,cTn-I含量,心肌组织细胞凋亡的情况以及电镜观察心肌细胞超微结构的变化,研究IR和NMDA对大鼠离体心脏的损伤作用;并研究心肌组织中NO、NOS,EAA的变化与心肌损伤的关系以及KMS对其影响。结果: 1mmol/LNMDA对正常大鼠离体心肌造成了与IR相似的损伤作用,即引起HR、LVDP、±dp/dtmax、CF下降,LVEDP升高,冠脉流出液中LDH、CK、cTn-I的升高,心肌细胞凋亡指数增加,心肌超微结构破坏,心肌组织匀浆中NO、tNOS、iNOS升高,cNOS下降,与对照组(NC组)比较差异显著(P<0.01)。KMS(氯胺酮(0.001mmol/L+硫酸镁(1.5mmol/L)可抑制IR和NMDA引起的上述变化,与IR和NMDA组间各项观测指标对比差异显著(P<0.01)。结论:大鼠心肌组织中检测到了EAA的存在,兴奋性中毒也可能发生在心脏。KMS的心肌保护作用可能是通过抑制心肌组织NOS活性,减少NO生成,抑制EAA释放和抗凋亡实现的,此机制可能与抑制NMDAR激活有关。