硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺组成的重复二糖单元链接形成的一类糖胺聚糖,其共价附着于蛋白质并广泛分布在软骨组织和细胞膜上。研究发现硫酸软骨素具有多种生物活性和药理作用,目前主要作为保健品口服或注射使用,国际上主要应用于治疗骨关节炎。由于硫酸软骨素分子量大且分布范围较宽,结构中缺少生色团,导致对其的检测和分析一直是一个难点和瓶颈问题。受限于体内分析技术(难点在于硫酸软骨素含量少、难检测、样品基质复杂),目前对于硫酸软骨素在体内的药物代谢动力学过程尚不十分清楚,这在一定程度上制约了硫酸软骨素被开发成更多的药物剂型以发挥其多种药理作用。因此,建立体内高灵敏分析方法进而探明硫酸软骨素的药代动力学过程对于硫酸软骨素进一步的开发应用和临床合理用药具有重要的意义。本研究的具体内容综述如下:1.基于在线和离线富集技术建立了一种分析硫酸软骨素的毛细管电泳方法。最优的电泳条件为:毛细管为内径75 μm、有效长度40 cm、总长度49 cm的熔融石英毛细管,检测波长为200 nm,电泳温度为25℃,缓冲液为20 mmol/L磷酸二氢钠-90 mmol/L乙二胺-磷酸缓冲液(pH 3.0),分离电压为-15 kV。通过场放大和大体积样品堆积在线富集结合十六烷基三甲基氯化铵离线富集技术,富集效果良好,方法学验证均符合要求。2.建立了一种测定硫酸软骨素含量的流动注射-化学发光法。确定的最佳条件为:泵速3 ml/min,管路长度30 cm,鲁米诺浓度0.2 mmol/L,氢氧化钠浓度0.02 mol/L,过氧化氢浓度0.05 mol/L,鲁米诺储备液放置7天后使用。在最佳条件下,硫酸软骨素标准曲线的浓度范围为25 ng/mL～250 ng/mL,检测限为5 ng/mL,精密度为2.5%(n=6)。与药典方法相比,所建方法简单、快速、准确、灵敏度高、专属性好,适用于硫酸软骨素的含量测定。3.采用建立的高灵敏分析方法,对硫酸软骨素的药代动力学进行了初步研究。确定了最优的血浆和组织样品处理办法,建立了血药浓度-时间曲线,获得了药代动力学参数。结果显示大鼠灌胃给药后,硫酸软骨素迅速吸收入血,半小时即达峰值,其半衰期随给药剂量的增加而延长,生物利用度随给药剂量增加而升高,药代动力学参数符合二室模型。在所设剂量范围内,硫酸软骨素的体内动力学特征呈非线性。组织分布实验结果显示该药在吸收入血后,1h内迅速分布到膝软骨以及血液较为充盈的心、肝、脾组织中,之后逐渐分布到肺和肾组织中,4-12 h后各组织器官中的药物含量均呈下降趋势。排泄实验结果显示该药在0-12 h主要随粪便排出体外,在12-24 h主要随尿液排出体外,24 h后剩余的少量则通过尿液和粪便共同排泄。综上,本研究的创新点如下:1.首次建立了一种毛细管电泳在线与离线富集结合的硫酸软骨素的含量测定方法,富集倍数为130倍,检测限为50 ng/mL。2.首次发现了硫酸软骨素酶解产物可以增强鲁米诺-过氧化氢体系发光强度这一重要现象,开发了一种简单、快速(50 s)、高灵敏(检测限为5 ng/mL)的流动注射-化学发光法。3.采用建立的高灵敏分析方法,对硫酸软骨素的药代动力学过程和特征有了初步研究结果,为临床合理用药及今后硫酸软骨素药代动力学的深入探讨提供了实验基础。