反胶团萃取牛血清白蛋白的研究

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本文对CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)/异辛烷/正戊醇反胶团体系萃取牛血清白蛋白(BSA)的相关性能进行了研究,论文主要分三个方面进行。首先确定了反胶团萃取BSA的较优实验条件;然后研究了反胶团中BSA的反萃取情况;最后一部分考察了CTAB/异辛烷/正戊醇对BSA的特异选择性。 萃取实验主要集中在以下两点。(1)考察了表面活性剂浓度、原料相pH、离子浓度和种类、助溶剂比例、萃取温度、搅拌速率和油水比对牛血清白蛋白萃取率的影响,找到了适合BSA萃取的较优实验条件。实验表明,静电作用力是该萃取过程的主要推动力,随原料相离子浓度增加,萃取率降低,这主要是因为离子在反胶团内核和BSA之间产生了屏蔽效应。适宜比例的正戊醇有助于BSA萃取率的提高。在表面活性剂(CTAB)浓度为0.02-0.04mol/L、pH 9.0-11.0、离子浓度KCl/NaCl 0.05-0.2mol/L、正戊醇比例0.2-0.4、室温、搅拌速率200-300rpm、油水比0.67-1.5时,BSA的萃取率较高,最高可达98%;(2)为进一步的实验,进行了简单的反萃实验,证明BSA反萃后仍保持较好的活性。 BSA的反萃实验主要以萃取实验为依据,考察了反萃条件(反萃水相pH、离子浓度、反萃时油水比、反萃时间)对BSA反萃率的影响。通过实验得到,原料液中BSA浓度越低,其萃取率和反萃率越高。当反萃水相pH接近BSA等电点时,反萃率最高,这主要是由于该萃取过程受静电作用力控制。在条件选择适当的情况下,反萃率可达80%以上。并且通过实验可知,反萃水相离子浓度高时(>0.4mol/l),不仅无法提高反萃率,还会引起BSA的变性。 论文的最后通过对α-淀粉酶的萃取实验和BSA、溶菌酶的混合物分离实验,说明在一定实验条件下,CTAB/异辛烷/正戊醇对BSA具有一定的特异选择性,可以根据等电点不同进行目标蛋白的提取和分离。牛血清是一种复杂的混合物,除含有主要成分牛血清白蛋白外,还含有球蛋白、激素、氨基酸、葡萄糖等多种成分,自制的反胶团体系可以从这种牛混合溶液中提取牛血清白蛋白,并能重复利用。
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