【摘 要】
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为提高克氏原螯虾蜕壳的同步性和生长性能、降低其蜕壳死亡率、提升养殖管理水平、并探究蜕皮激素（露水草作为植物性蜕皮激素）对克氏原螯虾蜕壳调控的机制。本研究设置饲料中不同水平的露水草添加量饲喂克氏原螯虾幼虾,在养殖结束后观察并分析其对克氏原螯虾生长性能、肠道菌群、蜕皮相关基因的影响。主要研究结果如下:（1）露水草对克氏原螯虾生长性能、消化酶活性、蜕皮激素含量的影响设计并制备露水草（20%露水草提取物）
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为提高克氏原螯虾蜕壳的同步性和生长性能、降低其蜕壳死亡率、提升养殖管理水平、并探究蜕皮激素（露水草作为植物性蜕皮激素）对克氏原螯虾蜕壳调控的机制。本研究设置饲料中不同水平的露水草添加量饲喂克氏原螯虾幼虾,在养殖结束后观察并分析其对克氏原螯虾生长性能、肠道菌群、蜕皮相关基因的影响。主要研究结果如下:（1）露水草对克氏原螯虾生长性能、消化酶活性、蜕皮激素含量的影响设计并制备露水草（20%露水草提取物）的水平分别为0、0.25%、0.50%、1.00%、2.00%的等氮等脂饲料,并进行56天的养殖实验。结果表明,克氏原螯虾存活率、出肉率、抗氧化能力、消化酶活性及蜕皮激素含量显著提高（P＜0.05）,肝胰腺指数、肥满度等差异不显著（P＞0.05）,增重率随着存活率的提高呈现下降趋势。当露水草添加量为0.25%时,克氏原螯虾血浆中蜕皮激素含量显著高于对照组（P＜0.05）,谷草转氨酶、谷丙转氨酶最低,其余组与对照组无显著性差异,表明露水草添加没有造成克氏原螯虾肝胰腺损伤;当露水草添加量为0.50%时,克氏原螯虾存活率、出肉率、总超氧化物歧化酶（SOD）显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛（MDA）呈现下降趋势;当露水草添加量在0.25-0.50%时,克氏原螯虾肠道肝胰腺脂肪酶、胰蛋白酶活性显著高于对照组（P＜0.05）,α-淀粉酶虽然无显著性差异（P＞0.05）,但也在此添加量范围内消化酶活力最高;当露水草添加量大于1.00%时,克氏原螯虾总抗氧化能力（T-AOC）显著高于对照组（P＜0.05）。当露水草添加量为2.00%时克氏原螯虾存活率、出肉率、抗氧化能力、消化酶活性及蜕皮激素含量等均较低,与对照组无显著性差异,说明露水草添加量过高可能会对克氏原螯虾生长不利。（2）露水草对克氏原螯虾肠道菌群的影响为了深入研究露水草对克氏原螯虾生长性能的影响,根据（1）中分析的结果,选择处理组0.00%（CT组）、0.50%（CA组）、2.00%（HCA组）开展16s扩增子测序,以期得到露水草通过肠道菌群来影响克氏原螯虾的生产性能的菌群特征。16S rDNA测序共得到13084763条有效序列,在0.97的相似度下,得到了每个样品的OTU个数,CA组、HCA组、CT组特有OTUs分别是274、264、99个,三组共有的OTUs有1505个。α多样性指数分析显示三组样品中群落丰富度（observed species指数、chao指数）、群落的多样性（shannon指数、simpson指数）均无显著性差异（P＞0.05）。各组优势菌群均是变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、柔膜菌门（Tenericutes）、厚壁菌门（Firmicutes）。添加露水草后,变形菌门欧文菌属变为克氏原螯虾肠道第一优势菌群,对照组第一优势菌群为拟杆菌门拟杆菌属。KEGG功能预测显示,露水草添加对克氏原螯虾肠道样品的基因功能预测没有差异。（3）露水草对克氏原螯虾蜕皮相关基因表达的影响为了了解露水草对克氏原螯虾蜕皮及生长性能的基因表达机制,本文选择肝脏组织作为研究对象,研究不同露水草处理组中蜕皮相关基因的表达变化。首先,利用Ref Finder网站对候选参考基因进行综合分析。克氏原螯虾在基础日粮中添加不同水平的露水草条件下肠组织的内参基因AK与GAPDH最稳定,CYP2稳定性最差,在这一条件下选取AK和GAPDH为内参基因,将大大提高qRT-PCR结果的准确性。以AK为内参基因,随着露水草添加量的增加,克氏原螯虾蜕皮相关基因E75、ECR、RXR基因表达量逐渐增加,MIH基因表达量与ECR,E75、RXR相反。免疫基因Peroxiredoxin、Toll、Trypsin的表达呈先上升后下降的趋势。当露水草添加量在0.50%时,E75、ECR、RXR基因表达量显著高于对照组（P＜0.05）,添加量超过0.50%时E75、ECR、RXR基因表达量逐渐降低。MIH基因表达量与ECR,E75、RXR相反。当露水草添加量在0.25%时免疫基因Peroxiredoxin、Trypsin基因表达量最高,显著高于对照组和添加量大于1%的实验组（P＜0.05）。当添加量为1.00%时,Toll基因表达量最高,显著高于添加量小于0.25%且大于1.00%的实验组（P＜0.05）。当露水草添加量为2.00%时,蜕皮相关基因与免疫、消化、抗氧化基因表达量与对照组无显著性差异或者低于对照组,说明适量的露水草可以促进蜕皮相关基因表达,添加量超过2.00%时,可能会对蜕皮相关基因表达不利。
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