【摘 要】
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目的:通过尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（Purinomycin amino-nucleoside,PAN）建立大鼠原发性肾病综合征（primary nephrotic syndrome,PNS）模型,探究肾病综合征大鼠尿液、血清、肾脏组织中水通道蛋白-2（aquaporin-2,AQP-2）分泌及表达情况,同时监测血液、尿液中肾病综合征相关的各项生化指标。探讨AQP-2在肾病综合征发生及发展中的作用
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目的:通过尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（Purinomycin amino-nucleoside,PAN）建立大鼠原发性肾病综合征（primary nephrotic syndrome,PNS）模型,探究肾病综合征大鼠尿液、血清、肾脏组织中水通道蛋白-2（aquaporin-2,AQP-2）分泌及表达情况,同时监测血液、尿液中肾病综合征相关的各项生化指标。探讨AQP-2在肾病综合征发生及发展中的作用,为肾病综合征的治疗提供新的思路。方法:5-7周龄雄性SD大鼠,按照随机数表随机分为两组:实验室（PAN组）和对照组（生理盐水对照）,每组30只。适应性饲养5天以后,PAN组尾静脉注射嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）溶液100 mg/kg,参考相关文献建立肾病综合征动物模型,对照组注射等量的生理盐水,期间观察大鼠的一般情况。分别于造模后的第2、5、8天,每组取10只置于代谢笼内收集6小时尿液、血液、肾脏。检测尿液生化:尿肌酐、尿量、尿蛋白、p H、Na+、K+、Cl-、渗透压;检测血液生化指标:肌酐、p H、Na+、K+、Cl-;一半肾脏组织匀浆行ELISA检测AQP-2的分泌及表达,另一半肾脏组织多聚甲醛固定24小时后制作病理切片。结果:尿液生化指标中,与对照组相比,实验组（PAN组）第2天中的尿肌酐、尿蛋白、尿量和尿渗透压无改变,无统计学差异,而尿p H、Na+、K+和Cl-明显下降（P＜0.01）;在第5天,与对照组相比,实验组（PAN组）,尿渗透压无统计学差异,而尿肌酐、尿Na+下降（P＜0.05）,尿量、尿渗透压、尿p H、K+和Cl-显著下降（P＜0.001）,尿蛋白显著升高（P＜0.01）;在第8天时,尿肌酐、尿量、尿p H、尿Na+、尿K+和尿渗透压降低（P＜0.05）,尿Cl-显著降低（P＜0.01）,而尿蛋白显著升高（P＜0.01）。在血液生化指标中,与对照组相比,实验组（PAN组）第2天血液中的血浆肌酐、血p H、血Na+、血K+和血Cl-均无统计学差异;而在第5天,与对照组相比,血浆p H无统计差异,血浆肌酐升高（P＜0.01）和血K+降低（P＜0.05）;在第8天时,与对照组相比,实验组血浆肌酐升高（P＜0.01）、血p H升高（P＜0.01）、血Na+降低（P＜0.05）,但血K+和血Cl-均无统计学差异。肾脏的病理学切片,肾脏HE染色显示,对照组尾静脉注射生理盐水,其肾脏组织在第2、5、8天各个时间点的病理学无改变,表现为肾小球细胞分布均匀,肾小球结构完整,内皮细胞及系膜细胞分布均一,无过度增值表现,周围血管无炎症细胞浸润。在尾静脉注射PAN（100 mg/kg）建立肾病综合征的模型组即PAN组,可见内皮细胞及系膜细胞大量增殖,肾小球及周围大量炎症细胞浸润,在尾静脉注射PAN第2天时候,肾组织结构轻度异常,视野内肾小球结构完整,囊腔大小正常,肾小球内系膜细胞数量未见减少,毛细血管袢结构清晰;肾小球上皮细胞胞核圆润,未见水肿、变性,管腔未见扩张;间质可见少量炎症细胞浸润;而在第5天时候,肾小球内皮细胞及系膜细胞大量增殖,周围细胞间隙大量炎症细胞浸润,肾小球周围小血管被浸润的炎症细胞堵塞,导致血管腔狭窄,部分肾小体出现坏死;在第8天时,肾组织结构重度异常,视野内组织局部可见重度纤维化,伴有大量炎症细胞浸润;还可见少量散落的坏死的细胞;部分肾小管上皮细胞变性,管腔结构不清晰。在肾脏组织的免疫组化染色可见,在第二天,实验组（PAN组）与对照组中的AQP-2表达无差异,在第5天,与对照组相比,AQP-2在肾脏表达明显降低P＜0.01,其中第8天的分泌表达量较第5天更低（P＜0.01）。结论:在PAN诱导的肾病综合征模型中,AQP-2在PAN诱导的肾病综合征中表达降低,其表达量的高低与肾脏损伤的程度正相关,通过检测AQP-2的表达量可以预测肾病综合征的严重程度,这为肾病综合征的诊断和治疗提供新思路。
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