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目的:(1)通过多位点可变数目串联重复序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)研究世界多个国家和地区分离的布鲁氏菌的分子流行病学特征;(2)通过检测布病患者血清中白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的水平,探讨免疫相关因子IL-2、IL-8和TNF-a与布病的相关性;(3)分别构建含布鲁氏菌基因组目的基因FlgE、BLS-FlgE、FlgL和BLS-FlgL的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并对FlgE和BLS-FlgE蛋白的布病诊断价值进行初步评价。方法:(1)选择11个可变数目重复序列(variable-number tandem-repeat,VNTR)位点,使用BioNumerics软件,采用非加权配对算术平均法(Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean,UPGMA),对1953年至2013年间全球48个国家和地区分离的布鲁氏菌VNTR资料进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树(minimum spanning tree,MST),以及菌株的流行分布特征;(2)ELISA法测定布病患者血清和正常人血清IL-2、IL-8和TNF-a的水平,分析免疫相关因子与布病的关系;(3)从NCBI得到布鲁氏菌鞭毛蛋白基因FlgE、FlgL和2,4二氧四氢蝶啶合酶基因(BLS)序列,设计引物,利用PCR技术扩增得到目的基因,连接载体pET30a,转化Ecoli BL21感受态细胞,使用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE及Western blot鉴定,用带His标签的蛋白纯化试剂盒纯化蛋白。纯化后的FlgE鞭毛蛋白和BLS-FlgE融合蛋白建立间接酶联免疫吸附测定法(indirect Enzyme Linked Immunosorbent Assay,iELISA)检测布病阳性血清和健康人血清,计算iELISA方法的灵敏度和特异度。结果:(1)布鲁氏菌系统发育树的进化关系与经典的生物分型方法基本上吻合,但猪种生物5型菌株与其它猪种生物1、2、3和4型菌株关系较远;鲸种布鲁氏菌也分为两个部分,并且关系较远。通过聚类分析布鲁氏菌增加东非、西非、南非和亚洲谱系。中国是布病多发区,主要流行株为羊种布鲁氏菌,其次是牛种布鲁氏菌,猪种布鲁氏菌主要出现中国南部省份,犬种布鲁氏菌只在动物中犬中出现,人类中没有出现。(2)布病患者血清IL-2水平低于正常人,而IL-8和TNF-a水平则高于正常人,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示IL-8和TNF-a之间存在正相关(P<0.05)(3)成功克隆了FlgE鞭毛蛋白、FlgL鞭毛蛋白、BLS-FlgE融合蛋白和BLS-FlgL融合蛋白,经过优化表达条件,目的蛋白获得较大量的表达,免疫印迹结果显示可被阳性病人血清识别。以FlgE蛋白构建iELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为70.83%和41.67%,以BLS-FlgE蛋白构建iELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为68.75%和52.08%。结论:(1)布鲁氏菌具有种的系统发育树特征,并且具有分离的时间、地域和宿主的特异性;(2)布病与免疫细胞因子IL-2、IL-8和TNF-a水平相关。推测IL-8和TNF-a存在协同作用。(3)成功表达布鲁氏菌FlgE鞭毛蛋白、FlgL鞭毛蛋白、BLS-FlgE融合蛋白和BLS-FlgL融合蛋白,以FlgE鞭毛蛋白和BLS-FlgE融合蛋白分别作为诊断抗原灵敏度较高而特异度低,具有早期诊断价值。