马卵母细胞冷冻保存是马种质资源保护措施的一项重要技术,为马卵母细胞的体外培养、马的胚胎工程、克隆技术等提供技术支撑。玻璃化冷冻是现今卵母细胞冷冻保存的主要方法,其特点是简便、快捷、成本低。目前国外关于马卵母细胞玻璃化冷冻效率都不高,国内尚无相关报道。本研究以乙二醇、二甲基亚砜、蔗糖、聚蔗糖作为玻璃化冷冻保护剂,以开放式拉长细管（OPS）作为冷冻载体,从27组不同组合的平衡液、冷冻液和暴露时间中筛选出最优的冷冻方案。在实验一中我们通过卵母细胞在不同浓度的平衡液中达到最小体积的时间来确定处理时间,测得在平衡液ED10（10%EG+10%DMSO）中的处理时间为39s、平衡液ED15（15%EG+15%DMSO）中的处理时间为32s、平衡液ED20（20%EG+20%DMSO）中的处理时间为20s。实验二中我们对27组不同的玻璃化冷冻液配方进行了实验,将实验结果从不同浓度的平衡液、冷冻液和暴露时间三个角度分析,得出平衡液的冷冻效果为ED10＞ED15＞ED20,冷冻液的效果为EDFS30＞EDFS35＞EDFS40,暴露时间的效果为80s＞40s＞120s,根据分析结果,搭配最优平衡液、冷冻液和暴露时间得到的冷冻方案ED10+EDFS30+80s与从实验结果直接筛选的最优冷冻方案相一致。在实验三中,从27个冷冻组中筛选出三种不同冷冻效率的冷冻组:A组（ED10（39s）+EDFS30（80s））冷冻效率最优、B组（ED20（20s）+EDFS35（80s））冷冻效率较好、C组（ED20（20s）+EDFS40（120s））冷冻效率最差,与未冷冻的对照组比较,结果显示对照组与冷冻组A组的形态正常率与存活率无显著差异（P＞0.05）,但体外成熟率存在显著差异（P＜0.05）。对照组与B组、C组体外成熟率和存活率均存在显著差异（P＜0.05）。冷冻组之间A组体外成熟率与存活率均显著高于B组与C组（P＜0.05）,因此A组冷冻解冻后发育能力比对照组差,但冷冻效率显著比B、C组高。在实验四中,q RT-PCR结果显示玻璃化冷冻会引起马卵母细胞内凋亡基因BAX、BID、BOK、TP53表达量上调,玻璃化冷冻A组、B组、C组凋亡基因BAX、BID、TP53的表达显著高于对照组,B组、C组凋亡基因BAX、BID、BOK、TP53的表达显著高于A组,随着冷冻效果变差,凋亡基因表达量具有上调趋势。综上,我们设计的27组不同冷冻方案中ED10+EDFS30+80s的玻璃化冷冻方案,对比其他冷冻组效果最优,冷冻解冻后能够保持其减数分裂能力,具有较高的体外成熟率（19.3%）和存活率（41.9%,本研究中的存活率均指的是体外成熟后的存活率）。