【研究目的】检测肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）癌组织中B7-H3分子的表达水平,分析其表达量的临床意义;然后通过体内外实验探究抑制B7-H3分子对T淋巴细胞免疫活性的影响以及对HCC的免疫治疗作用,初步探讨对HCC免疫微环境的影响。【研究方法】1.收集61例经手术切除并经病理医师诊断的HCC癌组织样本,通过随访调查,收集整理这61例HCC患者的临床病理资料。2.通过免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）技术检测61例HCC癌组织中B7-H3的表达情况,依据染色强度和范围,采用半定量积分法判读,将其分为B7-H3相对高表达组和B7-H3相对低表达组。结合临床病理资料,应用IBMSPSS 25.0软件分析B7-H3的表达量与临床病理特征、T淋巴细胞浸润以及患者术后复发、总生存的相关性。3.体外实验分为抗B7-H3抗体（克隆号:MIH35）实验组和PBS对照组,在T细胞培养体系中添加适量IL-2维持其体外增殖状态,应用抗CD3、CD28纯化抗体预先激活T细胞。实验组肝癌细胞（hepa1-6）事先与MIH35在37℃孵育2 h,按照不同的效靶比（1:1,3:1,5:1）将活化后的T细胞和肝癌细胞共培养24 h,应用凋亡检测试剂盒以及乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）细胞毒性检测试剂盒,比较实验组和对照组T细胞对肿瘤细胞杀伤效率的差异;最后过酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测两组共培养体系中促炎性细胞因子的分泌情况。4.成功构建小鼠肝癌皮下荷瘤模型,荷瘤小鼠被随机分为抗B7-H3抗体（克隆号:MJ18）治疗组,同型免疫球蛋白（Ig G1）对照组,空白组（PBS）。根据小鼠体重（MJ18:5 mg/kg,Ig G1:5 mg/kg）经尾静脉注射抗体,每3天注射一次,一共给药4次。通过连续监测皮下肿瘤体积和小鼠的生存期,评估MJ18在体内抑制肝癌细胞的能力。5.应用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）和免疫荧光染色（Immunofluorescence,IF）技术分析荷瘤小鼠肿瘤组织内T细胞的浸润情况;ELISA检测各组肿瘤组织内促炎性细胞因子水平;最后,通过苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosinstaining,HE染色）观察小鼠重要器官的形态学改变,评估抗体的生物安全性。【研究结果】1.皮尔森卡方检验（Pearson’s chi-squared test）结果表明,B7-H3的表达水平与HCC患者术后复发（1年内,***P<0.001）、TNM分期（*P=0.028）以及T细胞浸润（*P=0.03）有显著的相关性。2.Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,高表达B7-H3的HCC患者1年无进展生存期（Progression free survival,RFS）明显短于低表达组（***P<0.001）,Cox’s回归分析结果提示高表达B7-H3分子是患者RFS（1年内）的独立危险因素（*P=0.021）,但两组患者的总生存期（Overall survival,OS）无统计学差异,这可能是由于随访时间过短引起。3.在体外杀伤实验中,T细胞对肝癌细胞的杀伤效率和效靶比呈正比,当效靶比为1:1,3:1,5:1时,实验组T细胞对肝癌细胞的杀伤率分别为54.26%、63.57%、73.23%,高于对照组（25.95%、49.09%、56.47%）,结果说明,体外抑制B7-H3能够增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,后续的LDH细胞毒性检测实验进一步验证了这一结论。此外,不同效靶比实验组共培养体系中均检测到更高水平的促炎性细胞因子IFN-γ及TNF-α的分泌。差异均具有统计学差异（*P<0.05）。4.成功构建小鼠肝癌皮下荷瘤模型,体内实验结果显示,各组小鼠肿瘤体积均有所增长,治疗组小鼠肿瘤的平均体积明显小于对照组（**P=0.0083）和空白组（**P=0.0037）,肿瘤的生长速率也明显减慢;与对照组相比,治疗组小鼠生存期显著延长（*P=0.0117）。肿瘤组织内CD8+T细胞浸润数目（***P<0.001）和IFN-γ、TNF-α的浓度也显著高于对照组（**P=0.0085,***P<0.001）。HE染色结果表明治疗剂量的抗体不会对小鼠的重要脏器造成损伤。【结论】1.B7-H3的表达与HCC患者术后复发（1年内）、TNM分期和T细胞浸润有显著的相关性;高表达B7-H3患者术后预后不佳,可以作为HCC预后不良的潜在标记物之一。2.抑制B7-H3分子能够增强T细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并促进IFN-γ、TNF-α的分泌。3.抗B7-H3抗体治疗可以诱导肿瘤组织中CD8+T细胞的浸润,同时促进肿瘤免疫微环境中IFN-γ、TNF-α的分泌,发挥抗肿瘤效应。