基于Nogo-A/NgR信号通路探究电针干预脊髓损伤大鼠神经再生抑制因子表达机制等研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zyhpeter2011
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目的:通过观察电针干预脊髓损伤大鼠督脉脊髓受损节段NogoA/Ng R信号通路相关因子及蛋白表达的影响,研究电针干预对脊髓损伤大鼠受损节段的干预机制。方法:将120只大鼠随机分为假手术组、损伤对照组、督脉组、胃经组、混合组,采用半横断法复制脊髓损伤大鼠模型,在造模成功第3天后,分别运用电针刺激督脉穴位、足阳明胃经穴位,并分别在干预前3天,干预后7、14、21天(即第3、10、17、24天)进行下肢功能评分(BBB评分)及取材。然后将得到脊髓组织进行实时荧光定量检测、Western blot检测、HE染色检测,采用HE染色观察组织受损情况;免疫组织化学染色对比各组大鼠Nogo-A/Ng R阳性细胞表达情况;q RT-PCR对比各组大鼠Nogo-A/Ng R的m RNA表达情况。结果:1.BBB评分结果:在第3天无明显著差异,损伤对照组和各电针治疗组神经功能随着时间的推移均呈逐渐上升的趋势。和假手术组相比,损伤对照组BBB评分结果明显降低,21d>14d>7d,但仍低于假手术组且有显著性差异(P<0.05)。和损伤对照组相比,胃经组、督脉组和混合组随着时间的增加,BBB评分均有一定程度的升高,各时间点和损伤对照组相比均有显著性差异(P<0.05),其中混合电针组升高最为明显。2.HE染色结果:假手术组各时间点脊髓形态结构基本正常,灰质区有少量囊泡出现,神经元结构和数量正常。督脉组、胃经组、混合组、损伤对照组第3天时损伤特别严重,出现大面积组织炎细胞浸润及中度坏死,少量脂肪变性,第7天时相较于损伤对照组,电针各组出血损伤有所减轻,出现大量脂肪空泡及少量炎细胞浸润;随着时间推移,损伤逐渐减轻,但21天时仍有少量神经元轻微固缩。3.免疫组化结果:假手术组各时间点,GAP43蛋白、synaptophysin蛋白、GFAP蛋白表达水平均较低,基本无明显变化。各组GAP43蛋白、synaptophysin蛋白、GFAP蛋白表达从3天开始逐渐升高,7天时到达最高值,随着时间的推移呈现逐渐下降的趋势,21天表达量最低,但仍高于假手术组。和假手术组相比,损伤对照组在7d和14d升高明显(P<0.05),3d和21d升高差异不明显(P>0.05)。和损伤对照组相比,胃经电针组和督脉电针组进一步升高,在7d和14d和损伤对照组相比,差异显著(P<0.05),3d和21d和损伤对照组差异不明显(P>0.05),混合电针组和损伤对照组相比各时间点均有显著差异(P>0.05)4.PCR检测结果:假手术组各时间点Nogo-A、Ng R和P75NTR基因m RNA表达量稳定,在各时间点无显著性差异。损伤对照组和各电针治疗组7d~21d随着时间的推移呈逐渐下降的趋势。和假手术组相比,损伤对照组表达明显升高,7d最高,7d后开始下降,21 d最低,但仍高于假手术组,各时间点与假手术组比较,有显著性差异(P<0.05),和损伤对照组相比,胃经电针组、督脉电针组和混合电针组Nogo-A、Ng R和P75NTR基因表达量均有一定程度的降低,各时间点与损伤对照组比较,均有显著性差异(P<0.05),其中混合电针组优于单一电针组。5.Western blot检测结果:假手术组各时间点Nogo-A、Ng R和P75NTR蛋白表达量稳定,在各时间点无显著性差异。损伤对照组和各电针治疗组7d~21d随着时间的推移呈逐渐下降的趋势。和假手术组相比,损伤对照组表达明显升高,7d最高,7d后开始下降,21 d最低,但仍高于假手术组,各时间点与假手术组比较,有显著性差异(P<0.05),和损伤对照组相比,胃经电针组、督脉电针组和混合电针组Nogo-A、Ng R和P75NTR基因表达量均有一定程度的降低,各时间点与损伤对照组比较,均有显著性差异(P<0.05),其中混合电针组优于单一电针组。结论:电针刺激通过调节脊髓损伤节段Nogo-A/Ng R的m RNA和相关蛋白的表达,实现对大鼠脊髓损伤后下肢运动功能的恢复和干预。
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