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目的：肝纤维化的形成是机体对肝损伤的一种修复过程，其特征性改变是细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝脏中过度沉积。肝纤维化的形成基础是肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化，活化的HSC细胞合成大量的ECM、平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA)等。越来越多的研究发现Wnt信号通路与肝纤维化的发生有着密切联系，尤其是Wnt经典信号通路，也称为Wnt/β-catenin信号通路。β-catenin（β-连环蛋白)是一种多功能的胞浆蛋白，也能介导Wnt信号传导，是Wnt经典信号通路的关键因子。糖原合成酶激酶(GSK-3β)在Wnt经典信号通路中可使β-catenin磷酸化并参与其随后的降解过程，从而保持经典Wnt通路的静止状态。而SB216763是GSK-3β的抑制剂，使胞浆中β-catenin大量累积并入核，从而激活Wnt经典信号通路。本实验应用GSK-3β抑制剂抑制其在体外培养的大鼠HSC细胞中的活性，通过测定β-catenin的水平以及Wnt靶基因mRNA的表达预探讨经典Wnt信号通路在大鼠HSC细胞中的作用机制。近年来中药复方制剂治疗肝纤维化的研究取得了很大进展，肝复康是本实验室经过多年实验总结的中药复方制剂。本实验通过培养肝星状细胞并使用SB216763及中药肝复康药物血清干预，预探讨肝复康通过Wnt经典信号通路抗肝纤维化的机制。方法：1.细胞培养：大鼠HSC-T6细胞株用含10%胎牛血清和DMEM培养基，于37℃，5%CO2混合气体的孵箱中培养，细胞达到良好状态后，所有细胞用无血清的DMEM培养基饥饿24小时后分组加药。细胞随机分五组加药，SB216763工作浓度依次为5,10,20,30,40umol/L(uM)，培养12小时后用比色微量滴定唑法(Microtitre tetrazolium，MTT)检测加药后细胞增殖情况，分析数据并选定SB216763最佳工作浓度为10uM、20uM。将细胞随机分为以下五组：对照组(DMEM中加10％正常血清)；SB21676310uM组；SB21676320uM组；肝复康组(10％肝复康药物血清)；SB21676320uM加肝复康组(SB21676320uM基础上用10％肝复康药物血清干预)。2.MTT:检测加药后大鼠HSC细胞增殖情况。3.Quant Reverse Transcriptase(RT)-polymerase chain reaction(PCR):检测大鼠HSC细胞中GSK-3β，β-catenin，CollagenI、Ⅲ，α-SMA，Wnt1， Wnt3a， Wnt10b mRNA的表达。4.免疫蛋白印迹(Western-blot):检测大鼠HSC细胞中β-catenin蛋白的表达。5.实验结果均采用SPSS13.0统计软件分析。结果：1.MTT实验结果SB21676310uM组与SB21676320uM组肝星状细胞均较对照组增殖明显，肝复康药物血清组较对照组增殖明显受到抑制，差异有统计学意义(P<0.05)；同时，肝复康药物血清加SB21676320uM组细胞增殖程度于SB216763组相比显著下降，差异有统计学意义(P<0.05)。2.RT-RCR实验结果SB21676310uM与SB21676320uM组肝星状细胞明显活化，CollagenI、a-SMA、β-catenin、Wnt1、Wnt3a、 Frizzled1、Frizzled2mRNA表达量明显增加，而肝复康药物血清组HSC细胞的表达量则明显下降，较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。同时SB216763(20uM)加肝复康药物血清组与SB21676320uM组比较也能较好的抑制以上各指标的表达。SB21676320uM组Gsk-3β mRNA表达明显下降,与对照组差别具有统计学意义(P<0.05)。3.Western-blot检测实验结果对照组大鼠肝星状细胞中β-catenin低表达，SB21676310uM组和20uM组相对于对照组细胞β-catenin表达量明显增加，而肝复康药物血清组相对于对照组其表达量则明显下降(P<0.05)；SB21676320(uM)加肝复康药物血清组相对于SB21676320uM组β-catenin表达量同样下降，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.抑制GSK-3β的活性，可激活大鼠HSC-T6细胞中的Wnt经典信号通路,上调大鼠HSC-T6细胞活性。2.中药肝复康可阻断Wnt经典信号通路激活，抑制大鼠肝星状细胞活化，为治疗肝纤维化提供理论依据。