【摘 要】
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研究目的:通过研究过表达及沉默miRNA-141对Bewo细胞侵袭性的改变,初步分析miRNA-141对ERK1/2调控表达,进一步探讨其在子痫前期发病机制中可能发挥的作用。实验内容:首先从美国国立生物技术信息中心（NCBI）找出miRNA-141目的基因序列数据,构建miRNA-up-真核表达质粒、miRNA-down-真核表达质粒、阴性对照质粒。选取人类胚胎来源的滋养细胞-Bewo细胞系作为研
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研究目的:通过研究过表达及沉默miRNA-141对Bewo细胞侵袭性的改变,初步分析miRNA-141对ERK1/2调控表达,进一步探讨其在子痫前期发病机制中可能发挥的作用。实验内容:首先从美国国立生物技术信息中心（NCBI）找出miRNA-141目的基因序列数据,构建miRNA-up-真核表达质粒、miRNA-down-真核表达质粒、阴性对照质粒。选取人类胚胎来源的滋养细胞-Bewo细胞系作为研究对象,构建完成的质粒进行转染。实验设置四个组:空白对照组,过表达组,抑制组,阴性对照组。转染48小时后于倒置荧光显微镜下观察细胞状态及荧光表达。转染48小时后采用Transwell侵袭实验评估各组细胞中,miRNA-141对其侵袭能力的影响;转染72小时后,通过Western Blot实验,检测成功转染miRNA-141后,对Bewo细胞ERK1/2表达水平的影响。统计学处理:运用SPSS 23统计软件进行数据处理。实验结果使用均数±标准差来表示,采用t检验进行组间差异性对比。Western blot实验结果使用image J进行蛋白条带和荧光强度定量分析处理,实验结果分析及图表使用Graph Pad Prism 8.0软件制作。规定P＜0.05有统计学意义。实验结果:1.与阴性对照组相比,抑制组的ERK1/2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,差异具有统计学意义;过表达组的ERK1/2蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）,差异具有统计学意义;阴性对照组、空白对照组两者无显著差异（P＞0.05）。结果表明:miRNA-141对Bewo细胞中ERK1/2的表达具有正向调控作用。即miRNA-141过表达时,能促进细胞中ERK1/2蛋白的表达,同理,抑制miRNA-141的表达时,细胞中ERK1/2蛋白的表达则降低。2.与阴性对照组相比,抑制组细胞的侵袭能力显著降低（P＜0.05）,差异具有统计学意义;过表达组细胞的侵袭能力无显著差异（P＞0.05）,差异无统计学意义;阴性对照组、空白对照组两者无显著差异（P＞0.05）。结果表明:抑制miRNA-141的表达时,Bewo细胞侵袭能力明显降低;过表达miRNA-141则对Bewo细胞侵袭无显著影响。实验结论:miRNA-141对Bewo细胞的侵袭能力起到调控作用,miRNA-141通过调控ERK1/2蛋白的表达参与子痫前期的发生发展。
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