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目的:1、探讨氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low Density Lipoprotein,ox-LDL)对造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响。2、建立ox-LDL加重造影剂所致急性肾损伤(Contrast-induced Acute Kidney Injury,CI-AKI)的体外模型。3、在ox-LDL加重CI-AKI体外模型的基础上探讨线粒体损伤、线粒体自噬、氧化应激在ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中作用。方法:1、本实验采用大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)作为体外培养的研究对象。2、不同浓度(0、25、50mg/mL)的ox-LDL和碘海醇(100 mgI/mL)共同培养NRK-52E细胞4小时,流式细胞仪检测各组NRK-52E细胞的凋亡情况。探索不同浓度的ox-LDL对造影剂诱导肾小管上皮细胞的影响,并摸索出ox-LDL加重CI-AKI体外模型的最佳ox-LDL浓度。3、在上述实验中得到的最佳ox-LDL浓度进行后续实验。将NRK-52E细胞分为4组:对照组(control组)、碘海醇组(Iohexol组)、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组;(1)对照组:加入等体积无血清培养基,(2)碘海醇组:加入100 mgI/mL碘海醇,(3)ox-LDL组:加入50mg/mL ox-LDL,(4)碘海醇和ox-LDL组:加入50mg/mL ox-LDL和100 mgI/mL碘海醇。采用流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡和活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的表达,Western-blot检测胞浆及线粒体中细胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的表达,JC-1法检测线粒体膜电位(Mitochondrial Membrane Potential,MMP),探讨ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的分子机制;免疫荧光双染法检测Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共表达情况,初步探讨线粒体自噬是否参与ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。结果:1、与对照组相比,加入不同浓度的ox-LDL和碘海醇共同培养NRK-52E细胞,随着ox-LDL浓度的增加,细胞的凋亡率也随之增加(P<0.05),当ox-LDL浓度为50mg/mL时,细胞凋亡率最高(P<0.05)。2、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的细胞凋亡率均增加(P<0.05),与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL(50mg/mL)组的细胞凋亡率增加更为显著(P<0.05)。3、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的ROS的表达均增加(P<0.05),与碘海醇组相比,ox-LDL和碘海醇组的ROS的表达更加显著(P<0.05)。4、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的胞浆/线粒体Cyt c表达均增加(P<0.05),与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组的胞浆/线粒体Cyt c表达明显增加(P<0.05)。5、与对照组相比,碘海醇组、ox-LDL组、碘海醇和ox-LDL组的MMP均下降(P<0.05),与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组的MMP下降更加明显(P<0.05)。6、细胞凋亡率与ROS的表达呈正相关(r=0.9167,P<0.01);细胞凋亡率与胞浆/线粒体Cyt c表达呈正相关(r=0.8566,P<0.01),与MMP呈负相关(r=0.8276,P<0.01)。7、与对照组相比,碘海醇组中Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共定位表达增多;与碘海醇组相比,碘海醇和ox-LDL组中Lyso-Tracker Red标记的溶酶体与Mito-Tracker Green标记的线粒体共定位表达减少。结论:1、Ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。2、成功建立ox-LDL加重CI-AKI的体外模型。3、线粒体损伤、氧化应激是ox-LDL加重造影剂诱导肾小管上皮细胞凋亡的机制之一。4、线粒体自噬可能参与ox-LDL加重造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。