随着全球变暖的形势越来越严峻,平均温度的升高已经是不可逆的事实。过高的环境温度会对植物造成损伤,不仅影响种子萌发,加快叶片衰老、籽粒成熟,也会导致生殖器官发育不良,影响花粉活力,降低结实率。而在植物漫长的演化过程中,已生成一套精密的信号传导系统来适应高温。热休克转录因子就在植物耐热胁迫中具有关键作用,已有大量研究报道拟南芥热休克转录因子应答高温的分子机制。但是植物响应高温是一个复杂的过程,也必然存在其他基因的调控。为探究其他调控基因,完善热调控网络,我们进行一系列的实验,旨在获得相关基因并揭示其可能的分子机制。基于此我们展开了实验,结果如下:1以经过38℃热激处理后的拟南芥幼苗为材料,提取其总生物量的RNA,反转录成cDNA,核酸胶检测条带分布在100-3000 bp,与载体共转入酵母菌株Y187中,构建用于筛选热休克转录因子互作蛋白的酵母文库。经统计计算,该酵母库的独立克隆数为2.82×108个,文库滴度为1.88×108 cfu/mL,库中插入片段大小显示分布在100-2000bp之间,可用于蛋白质的筛选。2利用酵母筛库的实验技术,我们对已经明确的热休克转录因子HSFA1、HSFA2、HSFA3、HSFA7a、HSFB1、HSFB2、HSFB2a、HSFB3、BZIP28、NAC019 和 DREB2A进行文库筛选,并从中挑选出25个潜在的候选基因。3我们订购了候选基因的相关突变体,并通过高温筛选的方法,获得一个高温敏感突变体hot5-1,所在基因命名为HOT5。4为进一步确认高温表型,订购该基因的其他突变体,进行高温实验,发现同样出现下胚轴和根长变短的表型,更加明确该基因在调控高温响应过程中具有重要作用。5 QRT-PCR实验发现该基因受到高温的迅速诱导,并且表达量急剧升高,也证明该基因在高温响应中的作用。6双分子荧光互补实验进一步验证了 HOT5与诱饵蛋白的相互作用。根据以往的研究报道,植物通过分子伴侣类蛋白将变性的蛋白质复性来应对外界高温。因此,我们推测HOT5作为分子伴侣,辅助蛋白质的正确折叠,调控对高温的响应。