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研究背景：骨保护素(osteoprotegerin, OPG)又称破骨细胞抑制因子(osteoclast inhibitory factor, OCIF)，是一种能抑制破骨前体细胞(osteoclast precursor cell, OPC)分化、抑制破骨细胞(osteoclasts, OC)分化、活化成熟及细胞数量并诱导其凋亡的分泌型糖蛋白。OC的分化过程主要通过RANK/RANKL途径，核因子κB受体活化因子配体( receptor activator of NF-κB Ligand, RANKL)是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)配体超家族成员，能与位于破骨前体细胞上唯一的受体核因子κB活化因子(receptor activator of nuclear factor-kappa B, RANK)结合，将信号传入前体细胞内,引起破骨前体细胞分化、增殖和成熟，产生破骨细胞[1]，进而激活破骨细胞的形成和成熟，从而导致骨破坏[2]。OPG作为 RANKL的诱饵受体，优先结合 RANKL，阻断RANKL与 RANK结合，从而防止骨破坏[3-5]。同属于 TNF家族的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)，能促进牙周附着丧失，加速破骨细胞活动，刺激骨吸收，抑制胶原合成，同时能与OPG、RANKL互相影响。因此，RANKL/OPG系统及TNF-α可能是调节破骨细胞形成和功能的关键[2]。 目的：本实验通过对2型糖尿病伴重度牙周炎患者牙周探诊深度（probing depth, PD)、牙周附着丧失（attachment loss, AL）及空腹血糖（fasting blood glucose, FBG）的临床检查，同时，检测OPG，RANKL及TNF-α在炎性牙周组织中的蛋白和mRNA的表达。探索在2型糖尿病牙周炎中RANKL、OPG及TNF-α的表达与PD，AL，FBG否具有相关性，为2型糖尿病伴牙周炎的发生、发展的机制研究提供理论和实验依据。方法：本实验分成三组：2型糖尿病伴重度牙周炎组（DM+P），单纯重度牙周炎组（P）和健康对照组（H）。实验用Williams探针检测各个患者的牙周探诊深度（PD）、牙周附着丧失（AL），拔牙前一个月检测空腹血糖（FBG）水平。DM+P和P组患者取炎性牙周组织或（及）拔牙窝近牙槽骨吸收处肉芽组织（granulation tissue）；H组取其健康牙周组织作为对照。免疫组织化学检测各组织中OPG、RANKL及TNF-α的蛋白表达并用Image-Pro Plus6.0软件做半定量分析[6]。实时定量聚合酶链反应（real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR）检测三组牙周组织中OPG、RANKL及TNF-αmRNA表达水平，用2-△△Ct（Livak）法做相对定量计算。所有数据进行正态分布和方差齐性检验后，采用SPSS17.0软件进行统计学分析。 结果：1、临床指标的比较：2型糖尿病伴重度牙周炎组（DM+P）和重度牙周炎组(P)的PD, AL均显著高于健康对照组（H），各组间比较均有统计学意义（P<0.01）；2型糖尿病伴牙周炎组 PD, AL稍高于单纯重度牙周炎组，组间比较无统计学意义（P>0.05）；2型糖尿病伴重度牙周炎组FBG值显著高于单纯重度牙周炎组和健康对照组，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）；FBG在牙周炎组和健康对照组间比较无统计学意义（P>0.05）。 2、免疫组织化学检测比较：OPG在健康对照组（H）牙周组织中表达最强，在牙周炎组（P）组、2型糖尿病伴牙周炎组（DM+P）炎性牙周组织中表达依次减弱；各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。RANKL在健康对照组牙周组织中表达最低，在重度牙周炎组、2型糖尿病伴重度牙周炎组炎性牙周组织中表达依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。TNF-α在健康对照组牙周组织中表达最低，在重度牙周炎组、2型糖尿病伴重度牙周炎组炎性牙周组织中表达依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。RANKL/OPG比值在健康对照组最低，在重度牙周炎组、2型糖尿病伴重度牙周炎组依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。 3、RT-PCR检测比较：OPG在健康对照组（H）牙周组织中表达最强，在牙周炎组（P）组、2型糖尿病伴牙周炎组（DM+P）炎性牙周组织中表达依次减弱；各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。RANKL在健康对照组牙周组织中表达最低，在牙周炎组、2型糖尿病伴重度牙周炎组炎性牙周组织中表达依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。TNF-α在健康对照组牙周组织中表达最低，在牙周炎组、2型糖尿病伴牙周炎组炎性牙周组织中表达依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。RANKL/OPG在健康对照组（H）中最低，在牙周炎组、2型糖尿病伴牙周炎组中表达依次增高，各组间比较均有统计学意义（P<0.05）。 4、Pearson相关分析显示，牙周探诊深度与牙周附着丧失(r=0.735, P<0.01)、RANKL(r=0.414, P<0.05)、TNF-α(r=0.419, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.457, P<0.01)呈正相关，与OPG(r=-0.472, P<0.05)呈负相关；牙周附着丧失与RANKL(r=0.442, P<0.05)、TNF-α(r=0.412, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.483, P＜0.01)呈正相关，与OPG(r=-0.473, P<0.05)呈负相关；空腹血糖与RANKL/OPG(r=0.405, P<0.05)呈正相关，与PD，AL， OPG、RANKL、TNF-α无相关性（r<0.04)。OPG与 RANKL(r=-0.506, P<0.05)、RANKL/OPG(r=-0.554, P<0.01)呈负相关；RANKL与 TNF-α(r=0.429, P<0.05)、RANKL/OPG(r=0.657, P<0.01)，TNF-α与RANKL/OPG(r=0.446, P<0.05)呈正相关。 结论：结果表明，2型糖尿病伴牙周炎组炎性牙周组织中RANKL和TNF-α的表达水平均高于单纯牙周炎和健康对照组；OPG则降低，RANKL/OPG比值显著升高。临床表现为牙周探诊深度加深，牙周附着丧失严重。推测2型糖尿病在全身因素影响下，通过增强RANKL, TNF-α的表达，降低OPG表达，使RANKL/OPG比值失衡而引起、加重牙周炎，引起牙槽骨吸收。