柑橘是我国南方的主要栽培果树,受到低温的严重影响。周期性的冻害导致柑橘果实产量急剧降低,树体受害,造成巨大经济损失。培育抗寒性强的品种是解决冻害问题的关键之所在。由于柑橘的多胚性、性器官败育以及童期长等原因,传统的杂交育种等方法难以解决育种上存在的问题,而基因工程的发展,为柑橘育种提供了一个新的途径。但在早期的基因工程中,组成性启动子被广泛地用来驱动外源基因的表达,难以获得生长发育正常的转基因品种。故在柑橘抗寒育种中,寻找有效的低温应答启动子,更好地驱动相关基因的表达,为进一步了解柑橘抗寒机理奠定基础。本研究在己克隆的枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf)PtCBF1启动子和启动子缺失片断分析的基础上,深入研究该启动子的活性,判断该启动子是不是冷诱导型启动子,试图找出最有活性的冷敏感启动子,并对启动子的功能区域进行研究。旨在进一步揭示柑橘类植物抗低温的机制。其主要内容和结果如下:1.根据已克隆的PtCBF1启动子及启动子上具有的可能应答环境胁迫的元件,特别是上游顺式作用元件MYC识别位点在冷应答途径中的作用,将启动子缺失片断与报告基因GUS连接,根癌农杆菌介导的烟草转化,来研究启动子的功能特性。2.GUS组织化学染色和荧光定量试验表明:全长片段和571 bp启动子活性最强。PtCBF1启动子可能是一种冷诱导型启动子;推断MYC元件可能调节PtCBF1启动子感应低温信号,还可能受其它转录因子调控。3.RT-PCR表明,该PtCBF1基因启动子不只是一个低温诱导型启动子,可能还受其它胁迫的诱导。4.通过EMSA试验初步验证,枳中MYC顺式作用元件能与蛋白结合,诱导启动子的活性,但是此低温应答调控方式与拟南芥中反应通路是否一致,还有待进一步的研究。