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第一部分大鼠脑星形胶质细胞体外培养与鉴定Cdk5在星形胶质细胞中的表达 目的：研究Cdk5在体外原代培养星形胶质细胞中的表达情况。 方法：取出生3天内SD大鼠皮层，减碎组织，0.125％胰酶消化，200M滤网过滤，800rpm4°8min离心，重悬细胞，置于37°细胞培养箱培养。采用GFAP免疫荧光鉴定星形胶质细胞纯度，并通过免疫荧光染色观察Cdk5在大鼠皮层星形胶质细胞中的表达情况。 结果：通过参考文献培养、纯化、鉴定星形胶质细胞，采用GFAP免疫荧光鉴定星形胶质细胞纯度达到95%以上。免疫荧光染色显示Cdk5在星形胶质细胞中表达。 结论： Cdk5在皮层星形胶质细胞中表达丰富。 第二部分星形胶质细胞体外转染Cdk5-siRNA后对细胞增殖、摄取Glu能力及分泌BDNF的影响 目的：通过星形胶质细胞体外转染Cdk5-siRNA,观察转染后星形胶质细胞细胞周期、增殖、谷氨酸转运体、谷氨酸摄取能力的变化情况。 方法：原代培养星形胶质细胞，传代，纯度鉴定>95%后给予体外转染Cdk5-siRNA,利用悬浮转染方法，以提高siRNA的转染效率，转染成功后，通过RT-PCR，Western blot筛选出最有效的Cdk5-siRNA序列，以用于后续的实验。将实验分为CN-siRNA,CN-siT3,OGD-siRNA,OGD-siT3实验组，研究siRNA的转染对细胞增殖、摄取Glu能力及分泌BDNF的影响 结果：通过星形胶质细胞体外悬浮转染Cdk5-siRNA后，筛选出第三个序列为沉默效率最高的序列；流式细胞术结果显示体外转染Cdk5-siRNA后，不论是正常条件还是糖氧剥夺的环境，星形胶质细胞进入细胞周期S期的比例增加；同时Edu结果表明，体外转染Cdk5-siRNA后，促进星形胶质细胞增殖；星形胶质细胞谷氨酸转运体Western blot结果显示体外转染Cdk5-siRNA后，转染Cdk5-siT3组下调了谷氨酸转运体的表达，星形胶质细胞谷氨酸摄取能力结果表明转染Cdk5-siRNA后，星形胶质细胞谷氨酸摄取能力明显下调，尤其是星形胶质细胞处于糖氧剥夺的环境。同时转染Cdk5-siRNA减少了星形胶质细胞BDNF的分泌。 结论：通过星形胶质细胞体外转染转染Cdk5-siRNA后，流式细胞术、Edu、谷氨酸转运体及谷氨酸摄取能力可以初步认为，Cdk5具有抑制星形胶质细胞进入细胞周期，增殖的作用，此外，具有促进星形胶质细胞摄取谷氨酸的能力。