论文部分内容阅读
目的 建立多重半套式聚合酶链反应（multiplex semi-nested PCR） 快速检测脑脊液标本中常见病原菌的方法。 方法 通过对多数病原菌16S rRNA基因保守区和变异区的序列分析 ， 设计通用引物和革兰阴性菌及革兰阳性菌的特异性引物分别作为外侧 和内侧引物，建立了对不同细菌的16S rRNA基因进行多重半套式PCR 扩增方法；对该反应体系的敏感性和特异性进行了检测；并用该方法和 常规细菌分离培养法同时对62份临床脑脊液标本进行检测并进行了比较。 结果 革兰阳性菌和革兰阴性菌经扩增后均有1032 bp长度的DNA片段产生，同时 革兰阳性菌有一336 bp的特异性产物，革兰阴性菌有一127 bp的特异性产物； 而白色念珠菌、人乳头瘤病毒和人基因组DNA经用相同方法扩增后均未见特异性带产生； 该方法最低可检测出8 CFU/mL的大肠埃希菌；以常规细菌学分离培养为参照，对62份脑 脊液标本的检测结果表明，该方法敏感性为93.8%，特异性为95.7%，阳性预测值88.2%， 阴性预测值达97.8%。结论 该方法检测脑脊液感染的常见病原菌具有特异 、敏感、快速等优点， 具有较好的临床推广应用价值。