猴头菇多糖对氧化应激状态下断奶仔猪的保护作用

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目的:应激反应是生物机体对外界因素引起的刺激所产生的一类适应性应答,尤其是氧化应激的发生往往给畜禽养殖业造成严重的经济损失。猴头菇多糖(hericium erinaceus polysaccharide,HEP)是从猴头菇中提取的活性多糖,具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、保肝、抗炎和提高机体免疫力等功能,可以缓解氧化应激对断奶仔猪的损伤。脂多糖(LPS)是存在于革兰氏阴性菌的细胞壁外膜中的致病成分,是较为有效的氧化应激刺激原。本研究使用LPS建立断奶仔猪和IPEC-J2细胞氧化应激模型,旨在探索HEP对氧化应激状态下断奶仔猪的保护作用。方法:选用胎次接近的45头健康杜洛克×长白×大白断奶仔猪(平均日龄28±3d,平均体重10kg左右)进行临床饲养试验,随机分为5组,即空白组、模型组、0.2%HEP组、0.4%HEP组、0.6%HEP组,分别饲喂基础日粮、基础日粮、添加0.2%HEP的基础日粮、添加0.4%HEP的基础日粮、添加0.6%HEP的基础日粮。于试验第21 d,分别对模型组、0.2%HEP组、0.4%HEP组、0.6%HEP组每头仔猪腹腔注射100 μg·kg-1 BW LPS,空白组每头仔猪注射同等剂量的灭菌生理盐水(NS)。分别在0小时、1.5小时、3.0小时采集血样,采样后屠宰,收集肠道组织样品,测定仔猪的生长性能,血清抗氧化指标(T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px等),血清生化指标(葡萄糖、甘油三酯、谷草转氨酶、谷丙转氨酶等),血清免疫指标(IgA、IgG、IgM),肠道通透性指标(GLN、DAO),小肠道形态结构以及肠道紧密连接基因ZO-1、Claudin、Occludin mRNA和蛋白表达量。最后使用LPS构建猪小肠上皮(IPEC-J2)细胞氧化应激模型,以评价HEP对致敏IPEC-J2细胞的增殖、TJ相关基因mRNA表达的影响。结果:(1)0.4%HEP在早期断奶一周左右可以促进仔猪生长;(2)日粮中添加0.2%、0.4%、0.6%HEP能显著提高LPS应激下血浆中的T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性(P<0.05),显著降低MDA含量和LDH活性(P<0.05);显著降低LPS应激下血浆中的葡萄糖和甘油三酯含量、以及谷草转氨、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶活性(P<0.05);显著提高LPS应激下血浆中IgA、IgG、IgM含量(P<0.05),显著降低仔猪血浆中补体C3、C4含量(P<0.05);显著提高LPS应激仔猪血浆中谷氨酰胺活性(P<0.05),显著降低二胺氧化酶活性(P<0.05);(3)日粮中添加0.2%、0.4%、0.6%HEP能缓解LPS应激造成的仔猪小肠粘膜形态的损伤,显著提高十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)(P<0.05);(4)日粮中添加0.2%、0.4%、0.6%HEP可以显著抑制LPS应激后肠上皮细胞紧密连接ZO-1、Claduin、Occludin的mRNA及蛋白表达水平的下降(P<0.05);(5)不同的HEP浓度和作用时间对正常IPEC-J2细胞增殖均有显著影响(P<0.05),对LPS诱导的细胞氧化应激均有缓解作用(P<0.05);HEP的最佳浓度为250μg·mL-1、最佳作用时间为4 h;250μg·mL-1的HEP作用4、8 h均能显著提高氧化应激状态下,IPEC-J2细胞 Occludin、Claudin和 ZO-1基因的 mRNA 表达量(P<0.05)。结论:HEP对断奶仔猪生长具有一定的促进作用;能够缓解LPS造成的氧化损伤,提高断奶仔猪抗氧化能力和机体免疫力;降低LPS应激下肠道的屏障功能损伤,保护断奶仔猪小肠道形态结构的完整性,促进肠道紧密连接相关基因的表达,HEP可促进LPS氧化应激状态下IPEC-J2细胞紧密连接相关基因的表达,减少氧化应激对细胞紧密连接造成的损伤。
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