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他克莫司(Tacrolimus,FK506)是治疗免疫介导的炎性眼前段疾病的一种强力而有效的免疫抑制剂。然而,其水溶性差(3μg/mL)、生物利用度低,是限制FK506应用于眼科临床的主要障碍。为此,人们研究了许多新型FK506眼用制剂,如软膏剂、纳米粒、纳米乳、混悬液等,但其生物利用度仍未得到明显改善。目前,FK506眼用制剂在国内上市剂型为混悬液(Talymus?,日本千寿药业),其药效较常规滴眼液有一定程度的提高,但仍然容易受到泪液冲刷而流失大量药物。因此,研发一种眼部高滞留FK506制剂是一个亟待解决的问题。本课题通过制备FK506阳离子微乳-原位凝胶(Cationic Nanoemulsion-based In-situ Gel,CNE GEL)解决了上述问题。
首先以蓖麻油(4%,w/v)、中链脂肪酸甘油酯(6%,w/v)作为混合油相,西他氯胺(0.02%,w/v)作为阳离子表面活性剂,吐温-80(1%,w/v)、泊洛沙姆188(0.1%,w/v)作为非离子表面活性剂,甘油(2.2%,w/v)作为渗透压调节剂,通过高压均质制得FK506CNE,并对其进行理化性质考察。结果显示,FK506CNE粒径为178.8±2.7nm,Zeta电位为21.4±0.6mV,PDI为0.18±0.03。
以26%泊洛沙姆407和12%泊洛沙姆188共同作为凝胶基质,将FK506CNE进一步制备成FK506CNEGEL。测得其加入模拟泪液前后的胶凝温度分别为31±0.17℃、35.7±0.26℃。对最优处方制得的FK506CNEGEL进行理化性质考察,测得其粒径为176.8±1.63nm,Zeta电位为21.3±0.26mV,pH值为7.42±0.09,符合眼用制剂要求。流变学结果表明,FK506CNEGEL具备适宜的胶凝温度和适宜的凝胶黏度。采用无膜溶出模型考察凝胶溶蚀及药物释放之间的关系,结果表明凝胶中药物的释放主要受凝胶溶蚀的影响。影响因素实验结果表明,FK506CNEGEL在4℃下稳定,但对光照、高温较敏感,应避光冷藏贮存。室温稳定性实验结果表明,FK506CNEGEL在室温下放置3个月其含量稍有降低,其他指标合格。
采用Draize眼部刺激试验评分表及眼组织病理切片(HE染色)进行刺激性评估,结果显示FK506CNEGEL与Talymus?及生理盐水对比,均对兔眼无明显刺激性。
采用小动物活体成像仪对FK506CNEGEL在SD大鼠眼部的滞留时间进行评估,结果显示FK506CNEGEL在大鼠眼部的荧光强度残留率高于自制CNE及市售处方制得的CNE(Cationorm?),表明FK506CNEGEL在大鼠眼部滞留时间最长。
兔眼房水药动学研究显示,AUC(Talymus)为68.25±10.82ng·mL-1·h,AUC(CNE)为113.61±12.36ng·mL-1·h,AUC(CNE GEL)为128.34±13.09ng·mL-1·h,三者对比得AUC(CNE GEL)是AUC(CNE)的1.13倍,是AUC(Talymus)的1.88倍,表明FK506CNEGEL的生物利用度较另外两种制剂有所提高,展现出良好的眼部应用前景。
FK506CNEGEL是一种温度敏感型复合原位凝胶系统,能够有效延长药物在眼部的滞留时间,提高药物生物利用度。因此,其有望成为一种高滞留的FK506眼用制剂,为眼科临床提供一种新的治疗选择。
首先以蓖麻油(4%,w/v)、中链脂肪酸甘油酯(6%,w/v)作为混合油相,西他氯胺(0.02%,w/v)作为阳离子表面活性剂,吐温-80(1%,w/v)、泊洛沙姆188(0.1%,w/v)作为非离子表面活性剂,甘油(2.2%,w/v)作为渗透压调节剂,通过高压均质制得FK506CNE,并对其进行理化性质考察。结果显示,FK506CNE粒径为178.8±2.7nm,Zeta电位为21.4±0.6mV,PDI为0.18±0.03。
以26%泊洛沙姆407和12%泊洛沙姆188共同作为凝胶基质,将FK506CNE进一步制备成FK506CNEGEL。测得其加入模拟泪液前后的胶凝温度分别为31±0.17℃、35.7±0.26℃。对最优处方制得的FK506CNEGEL进行理化性质考察,测得其粒径为176.8±1.63nm,Zeta电位为21.3±0.26mV,pH值为7.42±0.09,符合眼用制剂要求。流变学结果表明,FK506CNEGEL具备适宜的胶凝温度和适宜的凝胶黏度。采用无膜溶出模型考察凝胶溶蚀及药物释放之间的关系,结果表明凝胶中药物的释放主要受凝胶溶蚀的影响。影响因素实验结果表明,FK506CNEGEL在4℃下稳定,但对光照、高温较敏感,应避光冷藏贮存。室温稳定性实验结果表明,FK506CNEGEL在室温下放置3个月其含量稍有降低,其他指标合格。
采用Draize眼部刺激试验评分表及眼组织病理切片(HE染色)进行刺激性评估,结果显示FK506CNEGEL与Talymus?及生理盐水对比,均对兔眼无明显刺激性。
采用小动物活体成像仪对FK506CNEGEL在SD大鼠眼部的滞留时间进行评估,结果显示FK506CNEGEL在大鼠眼部的荧光强度残留率高于自制CNE及市售处方制得的CNE(Cationorm?),表明FK506CNEGEL在大鼠眼部滞留时间最长。
兔眼房水药动学研究显示,AUC(Talymus)为68.25±10.82ng·mL-1·h,AUC(CNE)为113.61±12.36ng·mL-1·h,AUC(CNE GEL)为128.34±13.09ng·mL-1·h,三者对比得AUC(CNE GEL)是AUC(CNE)的1.13倍,是AUC(Talymus)的1.88倍,表明FK506CNEGEL的生物利用度较另外两种制剂有所提高,展现出良好的眼部应用前景。
FK506CNEGEL是一种温度敏感型复合原位凝胶系统,能够有效延长药物在眼部的滞留时间,提高药物生物利用度。因此,其有望成为一种高滞留的FK506眼用制剂,为眼科临床提供一种新的治疗选择。