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背景及目的胃癌是发病率很高的肿瘤,其容易发生局部侵犯及转移,早期胃癌及晚期胃癌临床预后有很大差别,尽管应用包括手术在内的综合治疗措施,晚期胃癌患者预后仍然较差,导致患者预后差的一个重要原因是患者早期诊断率低,诊断时多出现侵犯转移,而对胃癌侵犯发生、发展的分子机制缺乏认识,从而缺乏针对胃癌转移机制的一些治疗方法,因此发现一些用于检测其扩散转移的生物学指标具有重要意义,C4.4A基因位于19q13.31,编码一个含346个氨基酸残基的糖基磷脂酰肌醇锚定糖蛋白,属于Ly-6家族成员。研究证明C4.4AmRNA在正常组织中很少表达,其生理情况下参与创伤组织的修复,而创伤修复涉及细胞增殖及细胞迁徙等许多环节与恶性肿瘤相似或者共有,且其在已知许多恶性肿瘤中表达增加,参与其中的细胞侵袭转移等过程,并可作为大肠癌早期诊断指标,但胃癌组织中C4.4A表达情况未知,其在胃癌组织中表达情况及与胃癌患者临床病理资料相关情况未知,且其参与胃癌转移机制的具体环节步骤尚不清楚。本课题主要通过研究C4.4A在胃癌及正常组织的分布表达情况,分析其表达与临床资料相关性,初步探讨其与胃癌的发病机制,以期为胃癌的早期检测及治疗提供依据。方法:临床病历资料及组织切制作:收集2006年复旦大学附属华山医院普外科手术切除胃癌组织121例,配对正常组织121例(距胃癌病灶大于5cm处切取坐位对照),所有组织分2份,1小份迅速放入液氮罐中送至-80℃冰箱保存留作提取RNA,剩余大部分组织10%福尔马林溶液浸泡,胃癌组织蜡块行4μm组织切片,行免疫组化染色,检测C4.4A蛋白的表达。免疫组化染色及结果判定:采用二步法检测胃癌及正常组织病变中C4.4A的表达。结果判定:C4.4A蛋白阳性反应为棕黄色颗粒定位于细胞膜和细胞浆中,每个病例均由两个病理医生采用双盲法随即选择2个高倍视野,计数200个细胞,根据染色强度及阳性细胞数计分,染色强度:无特异性为0分,浅棕色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分,阳性细胞数所占比例评分如下:阳性细胞数<5%为0分,阳性细胞数5%-25%为1分,阳性细胞数26-50%为2分,阳性细胞数>50%为3分,两项成绩为最终结果,根据分数判定结果:0-4分为阴性,大于4分为阳性。RT-PCR:按照试剂盒说明分别提取胃癌及正常粘膜组织中总的mRNA,取总的RNA为cDNA第一链,在逆转录体系中加入反应所需酶及底物,制备好cDNA后,加入PCR扩增,进行DNA扩增,检测扩增的CT值。结果:RT-PCR结果显示C4.4AmRNA在胃癌组织中较正常胃粘膜表达明显升高(p<0.05),免疫组化显示(107/121,88.4%)的胃癌病人显示免疫组化染色阳性,免疫组化染色情况与RT-PCR检查结果相似。C4.4A的表达与患者肿瘤大小、浸润深度、淋巴转移、远处转移、TNM分期相关(p<0.05),与病人的年龄、性别、肿块部位无关。生存分析示C4.4AmRNA高表达的患者预后较差,多因素分析示其为判断胃癌预后独立指标结论:C4.4A在胃癌中表达升高在胃癌发生、发展中发挥重要作用,检测C4.4A的表达可助于胃癌转移的检测