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目前我国桑树种质资源居世界第一位,拥有丰富的桑叶资源,桑叶作为一种优良的中药材,现已经被国家卫生部列入既是食品又是药品的品种名单,桑叶作为药食两用的价值得到认可,总黄酮是桑叶药理作用的主要成分之一,在桑叶中含量较高,对其深入研究具有十分重要的意义。本文对桑叶总黄酮的提取、分离、抗氧化及护肝作用等进行了较为系统的研究,以期为桑叶总黄酮的开发利用提供理论参考。试验主要结果如下:
(1)桑叶经过石油醚处理后,A1(N03)3-NaNO2比色法测定总黄酮含量,方法简单,重复性好。采用二次回归正交旋转组合设计对桑叶总黄酮的提取进行分析,优化出桑叶总黄酮最佳提取工艺:提取温度为75℃,乙醇浓度为60%,提取时间为110min,料液比为1:23,此条件下桑叶总黄酮含量得率为1.90%,各因素对提取率的影响大小依次为:提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比。用硅胶柱层析对桑叶总黄酮提取物乙酸乙酯部进行梯度洗脱,共收集440管,合并得到46个不同的流份,高效液相色谱分离到具有一定纯度的3个化合物(I,Ⅱ,Ⅲ),其中化合物Ⅱ经质谱检测相对分子量为390。
(2)对101个桑品种的桑叶总黄酮含量测定比较,分析表明桑叶总黄酮含量从总体上符合正态分布,品种间存在很大变幅,差异达到5倍之多,其中粤诱33总黄酮含量最高,为3.92%,同时筛选出总黄酮含量大于3.5%的10个桑品种。对不同桑种、采收季节和染色体倍数分析,发现其对桑叶总黄酮含量均未达到显著差异水平(P>0.05)。对航天诱变植株和对照植株进行桑叶总黄酮含量分析,发现航天诱变组总黄酮含量显著低于对照组(P<0.01),且个体之间差异很大,发现了总黄酮含量极高的航天诱变单株。
(3)对101个桑品种的桑叶体外抗氧化能力测定比较,桑叶总抗氧化能力、清除·OH能力和清除O2·能力都基本呈现正态分布,品种间存在较大变幅;通过快速聚类分析,筛选出总黄酮含量、总抗氧化能力和清除超氧阴离子能力三指标均为最高的第1类群共16个品种;抗氧化活性、清除·OH能力和清除O2·能力与桑叶总黄酮含量之间呈现极显著正相关(P<0.01),表明桑叶总黄酮是桑叶抗氧化作用的重要物质基础之一,总黄酮含量可作为桑叶不同药用材料的参考指标之一。
(4)采用CCl4腹腔注射诱导建立小鼠急性肝损伤模型,通过测定小鼠血清和肝匀浆中SOD、MDA、GSH-PX、ALT和AST五个指标,对小鼠脏体指数和肝组织病变观察,结果表明:小鼠肝损伤模型通过腹腔注射CCl4建立,桑叶总黄酮高剂量组、中剂量组对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠抗氧化能力有显著提高,低剂量组作用不显著;桑叶总黄酮高、中剂量组能显著减轻小鼠的急性肝损伤程度,低剂量效果不显著;表明桑叶总黄酮有明显的动物体内抗氧化与护肝作用。