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食源性致病菌严重威胁人类身体健康,长期以来备受关注。检测食源性致病菌的方法包括培养计数法、免疫学方法、分子生物学方法和生物传感方法等。抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)是一种新型生物识别元件,已应用于检测食源性致病菌的生物传感器中。本文利用AMP在细菌表面丰富识别位点的优势,实现AMP的识别和信号放大的双功能,构建一系列快速、灵敏检测大肠杆菌0157:H7的比色传感方法。主要内容如下:1、免疫磁分离技术在分离大肠杆菌O157:H7中的应用免疫磁分离技术能从食品样本中特异性的分离富集食源性致病菌。本章对大肠杆菌0157:H7的捕获率高达90%。同时,本文利用磁分离-洗脱法,将磁珠表面捕获到的细菌洗脱,回收率为85%。该方法有望降低磁珠的非特异性吸附,降低背景信号,为后续检测方法开发奠定良好的基础。2、基于生物素-抗菌肽和生物素-辣根过氧化物酶竞争作用检测大肠杆菌0157:H7本章通过偶联生物素的AMP(bio-AMP)和偶联生物素的辣根过氧化物酶(bio-HRP)在链霉亲和素磁珠(MNB-SA)表面的竞争反应实现大肠杆菌0157:H7的比色法检测。实验过程中,bio-AMP与大肠杆菌0157:H7结合后通过离心作用随之沉淀到底部,上清中bio-AMP的浓度反映大肠杆菌0157:H7浓度。bio-AMP的浓度通过其与bio-HRP在MNB-SA表面通过竞争反应体现。该方法的检测范围为103-106 cftu/mL,检测限为721 cfu/mL。3,基于抗菌肽-辣根过氧化物酶的快速灵敏检测大肠杆菌0157:H7的比色分析法为进一步提高灵敏度,本章利用辣根过氧化物酶(HRP)修饰的AMP构建快速灵敏检测大肠杆菌O157:H7的光学传感平台。AMP-HRP与大肠杆菌0157:H7快速结合,未结合的AMP-HRP被过滤除去,加入HRP的底物后留在滤膜上的细菌-AMP-HRP催化产生蓝色。细菌浓度越高,蓝色越深;反之,则较浅甚至无色。在纯菌液中检测限低至13cfu/mL。经过免疫磁分离-洗脱之后,特异性得到显著提高。该方法在苹果汁和碎牛肉样本中检测限分别为119和451 cfu/mL,说明该方法在食源性致病菌检测方面具有一定的应用价值和推广意义。4、抗菌肽修饰的磁颗粒和免标记脲酶信号放大系统快速检测大肠杆菌0157:H7为简化操作,本章合成双功能的AMP修饰的磁颗粒,以脲酶为信号放大分子,建立快速、便捷和灵敏的检测大肠杆菌O157:H7的新型比色法。AMP修饰的磁颗粒(MNP-AMP)能够高效捕获大肠杆菌0157:H7。在中性溶液中,脲酶通过静电相互作用结合在MNP-AMP表面,被磁分离除去。MNP-AMP捕获目标菌后,磁珠表面脲酶的结合位点被封闭,导致脲酶留在上清中,催化底物显色。该方法能在30min内完成检测,检测限低至12cfu/mL。在苹果汁和碎牛肉细菌掺杂样品中检测限分别为84和233 cfu/mL,表明该方法在食源性致病菌检测中具有潜在应用价值。