【摘 要】
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本研究通过建立朊蛋白106-126 肽段(PrP106-126)感染分化PC12细胞模型,利用流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术、免疫组化以及蛋白质印记等技术从形态和功能两个方面对PrP106-12
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本研究通过建立朊蛋白106-126 肽段(PrP106-126)感染分化PC12细胞模型,利用流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术、免疫组化以及蛋白质印记等技术从形态和功能两个方面对PrP106-126在分化PC12细胞上的毒性作用、具体的作用机制以及该方法能否作为朊蛋白病的发病模型进行了研究,观察了从早期出现的氧化应激到最终细胞凋亡的过程。朊蛋白病是一类由具有传染性的朊蛋白(Prion protein,PrP)为病原体所致的散发的人畜共患的中枢神经系统变性疾病,是一组既有传染性又有遗传性的变性疾病。朊蛋白疾病的核心是朊蛋白的构型由正常的PrPC向致病的PrPSC的转化,其共同的病理学特征是脑的海绵状变性。但是在发病机制上,PrPSC在脑内沉积如何引起继发的病理变化,目前尚不清楚,这也是朊蛋白病一直缺乏针对性治疗的原因之一。鉴于PrP106-126 具有许多PrPSC的生物学特性,通过建立PrP106-126 感染分化PC12 细胞模型,本研究发现,PrP106-126 对分化PC12 细胞具有确切的毒性作用,细胞感染PrP106-126 后较早出现氧化应激现象,并且氧化应激持续存在,随后出现细胞内钙离子浓度增加、线粒体膜电位的下降、Ca2+ATP 酶活性降低,细胞能量代谢受到严重干扰,最终导致细胞凋亡,Bcl-2/Bax 系统稳态的变化和Caspase-3 的活化参与了诱导凋亡的过程。本研究认为PrP106-126 感染分化PC12 细胞是研究朊蛋白病的高效模型,PrP106-126 的毒性作用是通过持续的氧化应激、干扰细胞的能量代谢、钙超载、最终诱导宿主细胞的凋亡来实现的,并且氧化应激处于始动与核心的地位,提示从抗氧化损伤角度着手筛选药物可能是在朊蛋白病治疗上的一种值得尝试的方法。
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