小鼠体内外胚胎MET时期抗氧化酶表达的研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xianglongke2000
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有研究表明,小鼠早期胚胎母型向合子型过渡时期极易发生2-细胞阻滞现象,而外界环境中的各种因素能够造成胚胎内ROS含量升高,抗氧化酶是清除细胞内ROS的主要酶类。随着研究进展,MET时期可分为1-cell期(hCG后27h)、2-cell中期(hCG后42h)、2-cell后期(hCG后51h)、4-cell期(hCG后66h),但是对于2-细胞而言,哪个时期最易发生阻滞仍不清楚,并且克服细胞阻滞现象的主要抗氧化酶与ROS之间的变化关系尚不明确。因此本试验通过DCFH-DA染色法,确定各时期ROS含量,采用PCR扩增和蛋白免疫印迹方法,了解抗氧化酶与ROS之间的变化关系。通过试验得到如下结果:  1.DCFH-DA染色结果显示,小鼠胚胎MET阶段各时期中,2-细胞后期ROS含量最高,显著高于1-cell1期、2-cell中期、4-cell期。各时期体外胚胎内的ROS含量均高于体内组。  2.不同的抗氧化酶基因mRNA的表达量在1-cell到4-cell发育阶段均有所不同,GPX1基因在2-cell后期表达量最高,显著高于1-cell、2-cell中期、4-cell时期, SOD1、SOD2、SOD3、CAT、GPX2基因在4-cell期表达量最高,显著高于1-cell、2-cell中期、2-cell后期。  3.CAT、GPX1和SOD1 mRNA的表达量MET时期各细胞阶段体外组的表达量显著高于体内组,SOD2和SOD3 mRNA的表达量在MET时期个细胞阶段均呈上升趋势,SOD2在1-cell期和2-cell中期体内外表达量没有显著性差异,SOD3在2-cell后期和4-cell期体内外表达量没有显著性差异,GPX2 mRNA的表达量在MET阶段各时期体内组和体外组之间没有显著性差异。  4.蛋白免疫印迹结果显示,小鼠胚胎MET阶段各时期中体内外CAT和SOD1蛋白表达量在4-cell期最高,体内外GPX1蛋白均在2-细胞后期时表达量最高。SOD1和GPX1蛋白表达量体外组均高于体内组,但CAT基因蛋白表达在2-cell后期无显著性差异,说明合子型基因组激活时,转录和翻译不能同步进行所引起的。  结论:小鼠体内外胚胎MET阶段中,2-cell后期为细胞阻滞的主要时期。小鼠胚胎内CAT基因和SOD1基因是清除细胞内ROS,克服细胞阻滞的主要因素。
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