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背景:研究表明miR-499在房颤中的电重构及结构重构中具有重要的调节作用，房颤的重要病理改变就是心肌细胞的凋亡，p53及PDCD4是与细胞凋亡相关的两个重要基因，然而在心肌细胞中，还没有验证miR-499与p53、PDCD4的相关性，本研究通过构建及鉴定携带hsa-miR-499基因的慢病毒载体，转染心肌细胞，实现目的基因的过表达，检测p53、PDCD4在基因水平及蛋白水平的变化。验证miR-499在心肌细胞凋亡中发挥的作用。 方法:查询miRBase数据库获得miR-499的前体序列，设计含有BamHI和EcoRI酶切位点以及前体序列的目的基因，人工合成目的基因后经PCR扩增，与载体pHBLV U6-ZsGreen分别经BamHI和EcoRI双酶切后连接，将连接产物经DH5α感受态细胞转化，挑取阳性菌落，行PCR鉴定，鉴定正确的质粒进行DNA测序。将构建成功的质粒pHBLV-U6-ZsGreen-499及表达结构质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞进行病毒包装，包装完毕后收集病毒上清液，进行滴度测定。用构建好的慢病毒表达载体感染H9C2心肌细胞，实时定量PCR检测心肌细胞内miR-499、p53及PDCD4的表达，蛋白质印迹法检测p53及PDCD4蛋白表达情况。 结果:重组载体质粒经双酶切电泳分析及阳性菌液基因测序鉴定，插入目的基因序列正确，miR-499慢病毒载体构建成功，病毒滴度为2×108pTU/mL。慢病毒表达载体感染H9C2心肌细胞后qRT-PCR检测显示miR-499过表达，在过表达miR499的心肌细胞中，p53及PDCD4的基因及蛋白水平均受到显著抑制。 结论:成功构建了hsa-miR-499慢病毒表达载体，感染H9C2心肌细胞能有效提高miR-499的表达，miR-499可以通过抑制p53及PDCD4的基因及蛋白水平的表达来抑制心肌细胞的凋亡。