表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）是细胞表面受体酪氨酸激酶（Receptor tyrosine kinase,RTK）超家族ErbB家族的成员,在细胞增殖、生长、迁移、分化以及黏附等生理进程中起重要作用。EGFR的过表达和基因突变会引起细胞恶性增生,最终导致癌症的发生。在非小细胞肺癌中,有10-30%的患者携带有EGFR激活突变。传统的癌症治疗方法,如放疗和化疗等,在缓解患者病情的同时引起很大的副作用,而小分子抑制剂的出现,为携带EGFR突变的非小细胞肺癌患者带来了希望。但是小分子抑制剂的长期使用容易产生耐药,至今尚无药物能克服第三代EGFR抑制剂使用后产生的耐药点突变C797S。因此,发展能克服C797S突变的新一代高活性和高选择性EGFR抑制剂具有极其重要的意义。本论文以发展新一代EGFR激酶抑制剂为目标,通过构建一系列稳定表达EGFR全长及其6种临床相关突变体（EGFR-Del19、EGFR-L858R、EGFR-Dell9/T790M、EGFR-L858R/T790M、EGFR-Dell9/T790M/C797S、EGFR-L858R/T790M/C797S）的Ba/F3细胞,从而建立EGFR抑制剂的靶向细胞毒筛选平台。利用该细胞筛选模型,对实验室设计和合成的约1000个化合物进行了活性初筛和IC50测定,再用野生型Ba/F3和EGFR-WTBa/F3细胞进行化合物广谱毒性和选择性评价,得到了 4个具有高突变选择性和低毒性的活性化合物:19-025、19-053、19-067、19-058。这些化合物能显著地抑制携带 EGFR-Del19/T790M/C797S和EGFR-L858R/T790M/C797S三重突变的Ba/F3细胞的增殖,IC50均小于150 nM。Western Blot验证结果表明,活性化合物能够显著地抑制EGFR活性及下游信号通路的磷酸化。我们进一步在非小细胞肺癌PC9细胞中,利用CRISPR/Cas9基因编辑方法敲除内源EGFR构建了稳定表达EGFR突变蛋白的各种细胞系（EGFR-L858R、EGFR-Dell9/T790M、EGFR-L858R/T790M、EGFR-Del19/T790M/C797S、EGFR-L858R/T790M/C797S）,对活性化合物进行药效评价,发现化合物19-067、19-025、19-053对携带多种EGFR突变体的PC9细胞株同样具有较好的生长抑制活性。综上,我们构建了稳定表达激酶EGFR及临床突变体的靶向细胞毒筛选平台,并利用这个平台成功地筛选到了能够克服EGFR突变,尤其是C797S耐药点突变的活性化合物,为新一代EGFR小分子抑制剂的发展和非小细胞肺癌的靶向治疗奠定了基础。