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乳腺癌是女性人群中最常见的恶性肿瘤和主要的致死原因。乳腺癌细胞中雌激素受体表达情况与治疗和预后相关。雌激素可通过结合并活化雌激素受体(EstrogenReceptor，ER)，激发一系列复杂的信号通路从而发挥多种生物学作用。雌激素受体是核受体超家族成员，主要分α、β和γ三种。ERα的功能已较清楚，在日常工作中提到的雌激素受体即指ERα；ERγ的研究相对较少；而ERβ的结构和功能是近年研究的热点之一。ERβ1是野生全长型ERβ，且是唯一的功能型受体。ERβ1在雌激素的作用下同自身或其它亚型形成二聚体而发挥作用，而ERβ的其他亚型如ERβ2、4等则不能形成二聚体且自身无活性。基础研究发现ERβ具有抑制增殖的作用，临床研究显示ERβ在多种上皮性恶性肿瘤，如前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等表达降低甚至缺失，而肿瘤高表达ERβ的患者有较好的预后转归。因此认为ERβ在恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用。但具体的机制及信号通路尚不清楚。上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)在上皮性肿瘤转移过程中发挥着重要作用。其中E-钙粘蛋白(E-cadherin，E-cad)的表达下调是EMT发生中最重要的分子事件。在乳腺癌细胞模型上研究表明，ERα能通过下调slug的表达进而上调E-cad表达，抑制EMT的发生。但在乳腺癌方面上尚未有ERβ表达和EMT的关系研究报道。本课题就乳腺癌ERβ与EMT的关系展开初步实验研究。通过临床乳腺癌组织标本及体外细胞实验探究ERβ1与E-cad的表达调节关系，初步揭示乳腺癌ERβ1表达在EMT中的作用，为进一步阐明ERβ在乳腺癌中的生物学行为机制提供依据。研究方法和主要结果：1．ERβ1在人乳腺癌组织标本中的表达及其与E-钙粘蛋白表达相关性分析方法：收集131例人非特殊浸润性乳腺癌患者组织标本和临床病理信息。采用组织芯片和免疫组化染色的方法，检测乳腺癌组织中的ERβ1及E-cadherin的蛋白表达。采用spss17.0软件，分析ERβ1的表达与患者病理参数之间的关联，以及ERβ1与E-cadherin表达相关性。结果：在131例人非特殊浸润性乳腺癌患者组织标本中，ERβ1的表达(-)、(+)、(++)的例数分别为53例、67例和11例，ERβ1总表达率为59.5%(78/131)。E-cad表达(-)、(+)、(++)的例数分别为46例、44例和41例，E-cad的总表达率为64.9%(85/131)。其中47.3%(62/131)的病例同时表达ERβ1和E-cad。统计分析采用Spearman等级相关分析ERβ1与E-cad两者表达，相关系数r=0.456，P＜0.000，显示两者在乳腺非特殊浸润癌中表达呈正相关。ERβ1表达与组织学分级有关(P＜0.05)，组织学分级越高，ERβ1的表达缺失越多。ERβ1的表达与患者的年龄、月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移、ERα、PR以及Her-2的表达无关。2．人乳腺癌细胞MDA-MB-231中ERβ1对E-钙粘蛋白表达影响方法：采用质粒瞬时转染过表达以及siRNA干扰的方法，处理人乳腺癌细胞MDA-MB-231，使其高表达和降低表达ERβ1。收集转染48小时后的处理细胞，分为4组，分别为空白对照组、阴性对照组(仅加入脂质体)、ERβ1干扰组和ERβ1过表达组。采用RT-PCR以及WB的方法，分别检测各组细胞中ERβ1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平的表达，并对灰度值做统计分析。结果：空白对照组和阴性对照组之间两个指标在基因和蛋白水平表达没有差异(p＞0.05)。但较之对照组，ERβ1干扰组的ERβ1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平的表达均降低，说明干扰ERβ1RNA能使E-cadherin表达降低。ERβ1过表达组ERβ1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平的表达均升高，说明质粒转染高表达有效，且相应的影响E-cadherin表达升高。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。3．干预人乳腺癌细胞MDA-MB-231中ERβ1的表达对细胞侵袭和迁移能力的影响方法：采用质粒瞬时转染过表达以及siRNA干扰的方法，处理人乳腺癌细胞MDA-MB-231，使其高表达ERβ1或降低ERβ1表达。收集转染48小时后的处理细胞，分为4组，分别为空白对照组、阴性对照组(仅加入脂质体)、ERβ1干扰组和ERβ1过表达组。采用Transwell小室及BD Matrigel，分别培养后固定，染色，计数穿出小室的细胞数，统计分析。结果：在迁移和侵袭实验中，空白对照组和阴性对照组之间穿膜细胞数没有差异(p＞0.05)。但与对照组比较，ERβ1干扰组的穿膜细胞数在迁移和侵袭实验中均升高，说明ERβ1及E-cadherin的表达降低增强了乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。ERβ1过表达组中的穿膜细胞数在两组实验中均降低，说明高表达ERβ1使E-cadherin的表达变化，从而降低了细胞的迁移和侵袭能力。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌标本中，ERβ1表达与组织学分级有关，组织学分级越高，ERβ1的表达越少。且ERβ1与E-cadherin呈正相关表达关系。细胞及功能实验结果显示，干预ERβ1可影响乳腺癌细胞E-cadherin的表达以及细胞的迁移、侵袭能力。综上，我们认为ERβ1可通过E-cadherin参与乳腺癌的EMT过程。