论文部分内容阅读
目的:探讨DNA甲基转移酶(1DNMT1)基因干扰对胰腺癌BxPC-3细胞miR-148a表达、CpG岛甲基化水平及细胞增殖的影响。方法:将胰腺癌BxPC-3细胞接种于DMEM培养基,置于37℃、5%CO2孵箱中进行培养。实验分3组:转染空白脂质体至胰腺癌BxPC-3细胞作为空白对照组,转染阴性siRNA作为阴性对照组,转染DNMT1siRNA作为实验组。转染48h后,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测BxPC-3细胞中DNMT1mRNA相对表达量;Western blot法检测DNMT1蛋白表达量;荧光实时定量PCR法检测miR-148a基因表达量;甲基化特异性PCR(MSP)法分析miR-148a基因启动子CpG岛甲基化水平;四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT)检测BxPC-3细胞体外增殖活力。结果:(1)实验组、阴性对照组和空白对照组BxPC-3细胞中DNMT1mRNA相对表达量分别为(0.41±0.06)、(0.99±0.06)和(1.00±0.00);实验组DNMT1mRNA及蛋白表达量均显著低于空白对照组和阴性对照组(P <0.01);(2)实验组、阴性对照组和空白对照组BxPC-3细胞中miR-148a相对表达量分别为(3.23±0.17)、(1.03±0.67)和(1.00±0.00);实验组miR-148a相对表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P <0.01);(3)空白对照组和阴性对照组BxPC-3细胞中miR-148a基因启动子CpG岛均为甲基化阳性,而实验组miR-148a基因启动子CpG岛为甲基化阴性。(4)转染后48~120h,实验组细胞体外增殖速度较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P <0.05);在转染后的48h、72h、96h和120h不同时间点,实验组的细胞增殖抑制率分别为12.72%、22.78%、14.44%和18.18%。结论:DNMT1基因干扰后,胰腺癌BxPC-3细胞DNMT1表达水平下调,导致miR-148a基因启动子CpG岛发生去甲基化,从而使miR-148a基因表达水平上调,并抑制癌细胞增殖;在胰腺癌BxPC-3细胞中,miR-148a的表达受DNA甲基化调控;DNMT1和miR-148a可作为胰腺癌基因治疗的有效靶点。