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巨颌症（cherubism,MIM118400）于1933年首次被美国学者Jones进行报道。为一种罕见的疾病,是由良性颌骨发育不良导致的,典型症状为双侧颌骨的对称性肿大。颌骨肿大是由于过度吸收的骨组织被炎性纤维结缔组织替代,从而导致严重的面部畸形。典型的病变一般开始于2-5岁的儿童,发生骨吸收和面部肿胀,持续到青春期,在大多数病例青春期以后病变自发静止,此后也可自行修复。但是也有少数患者病变并不停止。患者常伴有牙发育异常,导致咬合关系紊乱,影响患者语言、吞咽、咀嚼和呼吸等功能,有的还可引起阻塞性睡眠呼吸暂停综合征,严重者可同时累及上颌骨,扩展至眼眶引起复视、视力减退等并发症。加之,研究已经证实,该病为常染色体显性遗传性疾病,故巨颌症的预防及理想的生物学治疗方法研究便成了众多学者密切关注和一直致力探索的目标,这也成了本课题组关注的研究目标。已有研究确定位于染色体4p16.3区域的SH3BP2基因为巨颌症的致病基因目前已发现十几种突变类型,大多数突变位于SH3BP2基因第9外显子上,仅有两例位于第3、4外显子,突变的碱基使其编码的蛋白结构发生了变化,导致巨颌症的发生。于2006年本课题组首先报道了一种新的点突变,为第9外显子上基因编码区第1256位碱基碱基由A突变为G,导致其编码的蛋白由Asp突变为Gly。SH3BP2编码的蛋白是一种接头蛋白,最早是通过扫描小鼠的包含有Sre同源3结构域（Sre homology3domain,SH-3）融合蛋白的cDNA文库时被发现的。巨颌症的颌骨骨组织过度吸收为巨颌症的一大特点,有研究者报道,当其表达在小鼠单核细胞系Raw264.7中被敲低后,Raw264.7分化为成熟的破骨细胞的过程障碍,提示它在破骨细胞的分化过程中起重要作用。巨颌症中的SH3BP2突变蛋白能够上调破骨前体细胞对破骨细胞分化因子（receptor activor of NF-Kb ligand, RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factors,M-CSF）的应答,表明其为功能获得型突变。SH3BP2还能调节活化破骨细胞分化所必需的转录因子T细胞核因子1蛋白（NFATcl）的活性；多数SH3BP2碱基替换突变的蛋白不与14-3-3伴侣蛋白结合,从而可以持续发挥刺激破骨细胞分化的功能。巨颌症中被破坏的骨组织被增生性炎症纤维组织替代,因此局部颌骨纤维化也是巨颌症的重要组织学特点,而该过程中成纤维细胞的生长状态可能受到单核-巨噬细胞等调控,但这种调控是否受SH3BP2的影响目前尚不清楚。明确这些问题,有助于了解SH3BP2突变如何参与巨颌症结缔组织反应,为探讨缓解症状和患者面部畸形的生物干预方法提供理论支持。第一部分突变型SH3BP2真核表达载体的构建及其稳定过表达Raw264.7细胞系的建立目的：为了实现体外研究巨颌症致病基因SH3BP2点突变导致的功能改变,明确其纤维异常增生的发生机制,体外建立SH3BP2突变（c.1256A>G）突变体的稳定转染细胞系。方法：采用定点突变方法,成功构建了巨颌症致病基因SH3BP2突变（c.1256A>G）真核表达载体,通过测序予以鉴定；用野生型和突变型真核表达载体分别转染单核细胞系Raw264.7,通过G418筛选过表达稳定株,挑取单克隆细胞团并扩增；用Western blott和Realtime PCR技术检测蛋白的表达水平。结果：（1）突变质粒构建通过BLAST比对,除第1256位碱基,SH3BP2测序结果与NM003023SH3BP2蛋白翻译区核酸序列一致,第1256位碱基已成功由A突变为G,与本课题组之前报道突变型SH3BP2序列相一致；（2）转染真核过表达载体并G418筛选后的克隆团,体积小而圆,野生型和突变型SH3BP2过表达的Raw264.7细胞外形无明显差异。Western Blott和Realtime PCR结果均显示：相对于未转染组,野生型、突变型SH3BP2基因转染组中各有8个克隆SH3BP2蛋白表达水平明显增高,P<0.01。结论：（1）本实验成功构建了突变型（c.1256A>G） SH3BP2真核表达载体；（2）成功建立了稳定过表达突变型（p. Asp419Gly）和野生型SH3BP2的Raw264.7细胞系。第二部分SH3BP2突变体对成纤维细胞增殖抑制作用的研究目的：用突变型和野生型Raw264.7过表达稳定株条件培养基,培养小鼠颌骨及长骨成纤维细胞。用两组稳定株的条件培养基探讨巨颌症突变的破骨细胞前体细胞的旁分泌对颌骨及长骨骨髓基质中的成纤维样细胞增殖的影响。方法：分别制备突变型和野生型Raw264.7过表达稳定株条件培养基,培养P2代4W雄性BALB/c小鼠颌骨来源成纤维样细胞和长骨来源的成纤维细胞,CCK-8试剂盒检测两种成纤维细胞增殖曲线。结果：过表达突变型蛋白组的条件培养基中成纤维细胞减少速率小于野生型组（P<0.05）。两种条件培养基对颌骨成纤维细胞增殖抑制作用均强于长骨成纤维细胞。结论：与过表达野生型SH3BP2的单核细胞相比,过表达突变型SH3BP2的单核细胞对颌骨成纤维细胞生长抑制作用较弱,并且颌骨成纤维细胞对过表达SH3BP2蛋白的Raw264.7细胞条件培养基较长骨敏感。可能是巨颌症病灶常见纤维异常增殖且仅颌骨受累的原因之一。