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目的:探讨Ⅰ型人类免疫缺陷病毒蛋白R(HIV-1Vpr)对人U251和大鼠C6胶质瘤细胞的增殖和凋亡的影响。
方法:1.构建并鉴定含有HIV-1Vpr基因的真核表达载体pUB6/Vpr。2.采用脂质体介导的方法将pUB6/Vpr转染至胶质瘤细胞系U251和C6中,RT-PCR检测Vpr的mRNA在两种细胞中的表达。测定MTT光密度值以观察转染后细胞的增殖活性的变化,细胞计数计算细胞生长抑制率,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡状态和细胞周期的改变。
结果:
1.成功构建HIV-1Vpr基因的真核表达载体pUB6/Vpr。
2.利用脂质体介导pUB6/Vpr转染至胶质瘤细胞系U251和C6中,24小时后提取细胞的RNA进行RT-PCR,可检测到在两种细胞中均有VprmRNA的表达。
3.pUB6/Vpr转染胶质瘤细胞系U251和C6后,可引起:①转染后的U251和C6细胞增殖能力受到抑制,MTT吸收值在转染后24小时、48小时和72小时均下降,与不含HIV-1Vpr基因的空载体pUB6/V5-HisA组相比,有统计学意义。②U251和C6细胞的增殖能力有所下降,U251细胞在pUB6/Vpr转染后48小时的生长抑制率为18.5%,C6细胞在pUB6/Vpr转染后36小时的生长抑制率为39.7%。③转染pUB6/Vpr后72小时,U251细胞处于G2/M期的细胞数高于pUB6/V5-HisA对照组。④光镜下发现pUB6/Vpr转染U251细胞一定时间后细胞出现凋亡表现,流式细胞仪检测显示转染pUB6/Vpr后的U251细胞与pUB6/V5-HisA组相比,在转染后24小时早期凋亡率增多,并且在48和72小时晚期凋亡率和/或死亡率增多。
结论:HIV-1Vpr能够抑制胶质瘤细胞系U251和C6的增殖活性,诱导细胞周期停滞于G2/M期,并能促进细胞的凋亡。