[目的] 选用几种不同的细胞因子组合,体外培养人外周血单个核细胞,诱导树突状细胞(dendritic cells,DCs)产生,并检测其表面分子的表达及刺激同种异体T淋巴细胞增殖的功能,从而建立诱导树突状细胞的最佳实验方法。并探讨细胞因子对DCs体外诱导、成熟及其功能的影响。 [方法] 无菌采集健康人外周血,肝素钠抗凝,采用密度梯度离心的方法获得单个核细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基在24孔板上贴壁培养2小时,弃去未贴壁细胞,即获得贴壁细胞,在24孔板上用含以下6组不同细胞因子的RPMI1640培养基进行培养①对照组;不加细胞因子②rhGMCSF/rhIL-4③rhGM-CSF/rhIL-4/PHA④rhGM-CSF/rhIL-13⑤rhGM-CSF/rhIL-13/PHA⑥PHA,各利因子加入的剂量分别为(在培养液中的最终浓度):rhGM-CSF(50ng/ml)、rhIL-4(40ng/ml)、rhIL-13(40ng/ml)、PHA(50μg/ml),观察DC的生成及免疫表型的表达情况。6天后,分别在各中加入LPS、IL-2、TNF-α等促成熟因子诱导DC成熟,加入的剂量分别为:LPS(20ng/ml)、IL-2(5ng/ml)、TNF-α(20ng/ml)镜下观察细胞形态。流式细胞术检测培养3,6,9天细胞CD1a、CD83、CD86、CD209表达:MTT法检测诱导培养的DC体外刺激同种异体T淋巴细胞增殖的活性,比较各成熟因子对DC作用的影响。 [结果] 1、经不同的细胞因子诱导培养6天后,倒置显微镜下可见多数细胞呈悬浮生长,细胞胞体较大,细胞表面可见有不规则突起。2、存IL-4、GM-CSF组合中加入刺激剂TNF-α、LPS或IL-2后,DC表面CD1a、CD83、CD86、CD209表达明显升高,其刺激同种异体T淋巴细胞的能力明显增强,刺激细胞/反应细胞为1:10时刺激T细胞增殖能力最明显。在各组中,尤以TNF-α、