【摘 要】
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目的:该实验拟用体外培养的方法,从肺癌患者恶性胸积液中分离、诱导出成熟功能健全的DCs,对此来源的DCs进行鉴定;研究DCs对同源TILs扩增的影响;探讨用DCs激活的TILs杀伤肿瘤
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目的:该实验拟用体外培养的方法,从肺癌患者恶性胸积液中分离、诱导出成熟功能健全的DCs,对此来源的DCs进行鉴定;研究DCs对同源TILs扩增的影响;探讨用DCs激活的TILs杀伤肿瘤细胞的能力,从而建立DCs引发抗肿瘤免疫反应的最佳培养条件.方法:1)无菌采取16例肺癌患者胸积液500~1000ml,用密度梯度离心辅以免疫磁珠分选的方法,分离出TILs、DCs及其前体细胞、肿瘤细胞.DCs及其前体细胞加入白介素-4(IL-4)、单核巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)诱导出DCs;2)在同一胸积液来源的经过密度梯度离心之后的TILs中,加入植物血凝素(PHA)、白介素-2(IL-2),激活TILs;3)用电镜和光镜分析培养48 h的DCs;4)当DCs被培养到8h、16h、24h、48h、96h(4d)、192h(8d)时,用流式细胞仪检测其表面分子的表达率;5)将不同培养时间段的DCs和TILs以不同的比例混合,用<3>H-TdR掺入法检测DCs激活TILs增殖的能力;6)用MTT法比较经DCs激活的TILs与未用DCs激活的TILs杀伤肿瘤细胞的活性差异.结论:1)肺癌患者恶性胸积液中单个核细胞经有关细胞因子诱导,可生成具有成熟功能的DCs;2)培养第48 h的DCs能有效扩增同源的TILs,按1:10的比值激活的TILs杀伤肿瘤细胞活性最强,DCs激活的TILs与肿瘤细胞的最佳效靶比是80:1.
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