副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)常引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及脑膜炎，由该菌引起的病又称为猪革拉斯氏病(Glsser’s Disease)。Hps是一种NAD依赖型、不运动的革兰氏阴性细小杆菌，属于巴斯德菌科(Pastteurellaceae)嗜血杆菌属(Haemophilus)。随着我国规模化养猪场的发展，副猪嗜血杆菌感染有明显增加趋势，已成为猪场保育仔猪发病率和死亡率增加的重要原因之一，并给养猪业造成重大经济损失。然而，我国目前尚无用于副猪嗜血杆菌分离菌株血清型和血清学调查的型特异性血清和抗原。鉴于此，开展分型血清的制备以鉴定分离菌株的血清型和相关快速诊断方法的建立，显得十分必要。 本试验首先从湖北、湖南、安徽、福建、等4个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到2株疑似细菌，进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定；根据副猪嗜血杆菌16S rRNA序列设计引物进行PCR扩增，得到预期的821bp的目的片断，最终证实为副猪嗜血杆菌。 试验中，我们将引进的副猪嗜血杆菌15种血清型标准菌株在TSA培养基上增殖，收获菌体，灭活后用于免疫家兔，制备了分型血清。分别运用玻片凝集试验和琼脂扩散试验对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测。结果表明，制备的抗血清有较好的特异性：在4℃下保存1个月、-20℃下6个月、冰冻干燥1年和-80℃下1年其效价无明显变化。利用制备的分型血清采用琼脂扩散试验对96株PCR阳性的副猪嗜血杆菌地方分离菌株进行了鉴定，主要流行优势菌株分别为血清5型(22株)、4型(18株)和14型(12株)，说明抗血清可用于分离菌株的鉴定分型。 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)由于具有敏感快速的优点，已被成功应用于许多病原的快速检测和疾病诊断中。以副猪嗜血杆菌tbpB上一段保守序列为目的片段设计合成了一对引物，以Hps 1—15型及本地分离血清型5型菌株为模板，经过模板制备方法和反应条件的筛选，建立了副猪嗜血杆菌tbp-PCR检测方法。该方法能从标准副猪嗜血杆菌血清型1、3、4、5、6、7、8、11、12、13、15型中扩增出与预期的保守序列大小相同的288bp片段，而标准胸膜肺炎放线杆菌11个血清型、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌扩增结果为阴性。另外，本方法对Hps的最低检出浓度达到了25CFU／mL。从模板制备的简便性，PCR检测的特异性和灵敏性都说明该方法快速简便、特异性好、灵敏度高，为副猪嗜血杆菌进一步的研究奠定了基础。 总之，本研究分离鉴定了2株副猪嗜血杆菌、制备了15个血清型的副猪嗜血杆菌标准阳性血清及对96株Hps进行了血清型分型。在分子水平上，我们进行了Hps tbpB保守序列的序列分析并建立了副猪嗜血杆菌tbpB-PCR检测方法，为进一步开