含中药富血小板血浆对骨折不愈合治疗效果的临床观察与实验研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhuguangpo123
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目的:本文包括临床观察与基础研究两部分。通过回顾分析富血小板血浆(PRP)在临床中治疗骨折不愈合的疗效,为PRP治疗骨折不愈合提供进一步依据。通过基础实验,探讨含骨碎补总黄酮PRP通过SDF-1/CXCR4通路干预大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的研究,探究其在骨愈合中促进骨修复的内在机制。方法:收集广州中医药大学第一附属医院自2016年1月至2020年1月采用PRP技术治疗骨折不愈合的患者14例。收集住院患者的性别、年龄、骨折部位及治疗方法等一般信息。结局指标收集临床愈合情况,影像学资料,并根据影像学得出外骨痂影像学评分标准、骨折线影像学评分及骨愈合时间。基础实验部分:提取大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),制备含骨碎补总黄酮PRP,将细胞分为含药PRP组、含药PRP+AMD3100组、AMD3100组、空白组四组,进行细胞成骨诱导。分别采用CCK-8检测MSCs在第1、3、5天的增殖率;采用ALP、茜素红钙盐染色检测MSCs在第7、14、21天的成骨能力;运用RT-PCR和Western bloting技术检测MSCs细胞中SDF-1、RUNX-2、BMP-2和ALP的m RNA的表达以及蛋白含量。结果:临床研究:共收集PRP治疗骨折不愈合病例14例,其中男性10人,女性4人。平均年龄41.14±15.05岁(19-64岁)。骨折不愈合部位:桡骨1例,股骨8例,胫骨3例,肱骨1例,尺骨1例;平均PRP治疗次数为1.43±0.62次。经治疗后,14例患者最终骨性愈合。平均愈合时间为234.64±54.39天;VAS疼痛评分:1.69±0.67影像学评分为4.36±0.48;随访时间为16.14±3.18月,均未见并发症出现。基础研究部分:CCK-8结果显示含骨碎补总黄酮PRP能提高MSCs的增殖率(P<0.05),AMD3100可以抑制含中药PRP组MSCs的增殖(P<0.05);ALP、茜素红染色结果显示含药PRP能提高MSCs中ALP的活性以及增加矿化结节的数量;RT-PCR、Western bloting检测提示含药PRP能增加SDF-1、RUNX-2、BMP-2和ALP的m RNA和蛋白的表达(P<0.05),AMD3100可以抑制含中药PRP组SDF-1、RUNX-2、BMP-2和ALP的m RNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论:通过病例分析,发现了PRP在治疗骨折不愈合疾病中,其优点有操作简便和缩短愈合时间等。通过干预大鼠MSCs细胞,探讨含骨碎补总黄酮PRP在骨愈合中的作用机制,初步证实了含骨碎补总黄酮PRP通过SDF-1/CXCR4通路干预大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。
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