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神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）是由躯体感觉系统损伤或疾病导致的慢性疼痛,临床表现为自发性疼痛、痛觉超敏和痛觉过敏。由于其发病机制极其复杂,NP的治疗仍是世界医学难题。神经炎症在NP的病理过程中发挥了重要作用。大量研究表明,白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）是神经炎症中的关键细胞因子。NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor 3,NLRP3）是IL-1β的重要上游分子,其产物半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1）是IL-1β成熟的必要分子,与神经炎症密切相关。芍药苷（Paeoniflorin,PF）是中医古方的常用的药物赤芍、白芍的主要活性成分之一,具有良好的抗炎和抗氧化活性。课题组的前期研究中发现,PF可有效缓解外周神经损伤大鼠痛觉超敏症状,并可降低大鼠脊髓促炎细胞因子IL-1β和肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factorα,TNF-α）的水平,课题组推测PF可能通过作用于NLRP3炎症小体实现对NP的缓解作用。为验证该假说,课题组围绕脊髓背角NLRP3炎症小体的活化研究PF对NP的作用机制。目的:采用慢性坐骨神经压迫性损伤（chronic constrictive injury,CCI）大鼠NP模型,围绕NLRP3炎症小体研究PF对NP的镇痛作用,并阐明其镇痛的分子机制。方法:1.将雄性SD大鼠（180-220 g）随机分为假手术（Sham）组和CCI模型组,采用CCI方法结扎大鼠右后肢坐骨神经,诱导大鼠的NP,通过疼痛行为学检测CCI术后大鼠机械痛阈和热痛阈变化,并采用Western blot法检测在NP状态下模型大鼠脊髓背角NLRP3炎症小体表达水平。2.雄性SD大鼠随机分为Sham+vehicle组、CCI+vehicle组、CCI+MCC950组、CCI+PF组。通过疼痛行为学检测给药后大鼠机械痛阈和热痛阈变化。采用免疫荧光法检测PF对大鼠脊髓背角NLRP3和caspase-1表达水平的影响。3.雄性SD大鼠随机分为Sham+vehicle组、CCI+vehicle组、CCI+ML385、CCI+PF和CCI+ML385+PF组。通过疼痛行为学检测给药后大鼠机械痛阈和热痛阈变化;采用Western blot法检测大鼠Keap1-Nrf2信号通路和NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平;采用免疫荧光法检测大鼠脊髓背角ROS含量;采用模拟分子对接模拟PF和Keap1的结合趋势。结果:1.大鼠术后恢复良好,无自噬行为和伤口感染。疼痛行为学结果显示,与Sham组相比,CCI组大鼠在术后3,7,11,15 d机械痛阈和热痛阈显著降低（P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001;P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001,P＜0.001）。表明CCI手术引起大鼠出现痛觉超敏症状。Western blot结果显示,与Sham组相比,CCI组大鼠脊髓NLRP3表达上调（P＜0.05）、caspase-1水平显著升高（P＜0.01）,脊髓pro-caspase-1水平无明显变化（P＞0.05）。结果表明NP状态下模型大鼠脊髓NLRP3炎症小体被大量激活。2.疼痛行为学结果显示,与CCI组相比,术后第11 d,CCI+PF组机械痛阈显著提高（P＜0.01）。与CCI组相比,术后第7 d和第11 d,CCI+MCC950组大鼠机械痛阈显著升高（P＜0.01,P＜0.001）。与CCI组相比,CCI+PF组术后第7 d和第11 d热痛阈显著提高（P＜0.01,P＜0.05）。与CCI组相比,CCI+MCC950组大鼠热痛阈在术后第3,7和11 d有明显提高（P＜0.05,P＜0.001,P＜0.01）。免疫荧光法结果显示,术后第11 d,与CCI组相比,CCI+MCC950组可观察到NLRP3和caspase-1表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.05）。与CCI组相比,CCI+PF组caspase-1表达水平明显降低（P＜0.05）。与CCI+MCC950组相比,CCI+PF组脊髓背角NLRP3和caspase-1表达水平无明显差异（P＞0.05,P＞0.05）。以上结果表明,PF对NP具有良好的镇痛作用,其镇痛作用与抑制NLRP3炎症小体激活相关。3.疼痛行为学结果显示,与CCI组相比,CCI+ML385+PF组和CCI+PF组机械痛阈均有显著提高（P＜0.01,P＜0.001）;CCI+ML385+PF组和CCI+PF组在术后第7 d热痛阈明显提高（P＜0.01）;术后第11 d,CCI+ML385+PF组和CCI+PF组大鼠热痛阈显著提高（P＜0.01,P＜0.001）。Western blot结果显示,术后第11 d,与CCI组相比,CCI+PF组大鼠脊髓Nrf2总蛋白和Keap1表达水平均无明显变化（P＞0.05,P＞0.05）,脊髓核Nrf2含量显著提高（P＜0.01）。与CCI+PF组相比,CCI+ML385+PF组大鼠脊髓Nrf2总蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）、脊髓核Nrf2含量显著下降（P＜0.001）。结果表明,PF对脊髓细胞内Nrf2总蛋白表达无影响,但对Nrf2向细胞核内转移具有促进作用。与CCI组相比,CCI+PF组大鼠脊髓背角NLRP3、caspase-1含量有明显降低（P＜0.05,P＜0.05）;CCI+ML385组和CCI+ML385+PF组大鼠脊髓背角NLRP3,caspase-1含量无明显变化（P＞0.05）。与CCI组相比,CCI+PF组和CCI+ML385+PF组大鼠脊髓背角pro-IL-1β、IL-1β含量显著下降（P＜0.01,P＜0.01;P＜0.001,P＜0.01）。结果表明,PF可抑制CCI大鼠脊髓背角NLRP3炎症小体的激活,降低IL-1β表达水平,减弱神经炎症。免疫荧光法结果显示,与CCI组相比,CCI+PF组大鼠脊髓背角ROS含量显著下降（P＜0.05）。与CCI+PF组相比,CCI+ML385+PF组大鼠脊髓背角ROS含量显著上升（P＜0.01）。分子对接模拟结果显示PF可以通过非共价键与Keap1 Kelch域对接。结合能:-50.5001 kcal/mol。以上结果表明PF可以通过促进Nrf2进入细胞核发挥抗氧化作用限制脊髓背角ROS水平,从而抑制NLRP3炎症小体的活化。结论:1.在NP状态下CCI模型大鼠手术侧脊髓背角NLPR3炎症小体被大量激活,PF通过抑制NLPR3的激活发挥对NP的镇痛作用。2.PF对NLRP3炎症小体的抑制作用与其激活Keap1-Nrf2通路调节抗氧化基因的水平,限制ROS水平有关。