据报道，CD4+和CD8+T细胞在硬骨鱼类中是存在的，并且在免疫系统中起着重要的作用。本文克隆鉴定了大西洋鳕鱼T细胞分化的五个相关基因，包括NF-κB抑制因子、TBK1、GATA-3、Foxp3、EOMES、并对其在体内的分布表达、启动区域结构和功能进行了研究，为进一步研究大西洋鳕鱼T细胞分化信号通路打下基础，本文还对牙鲆抗体阳性细胞在组织中的分布及免疫应答进行了研究。TBK1也被称为NF-κB活性激酶（NAK），是IκB激酶（IKK）家族中的一员，参与先天性和特异性免疫应答。大西洋鳕鱼的TBK1基因是由2190bp个核苷酸编码729个氨基酸的多肽组成。通过实时荧光定量PCR检测，TBK1在鳕鱼的肾脏中含量最高。体内通过PMA、polyI:C和β-glucan刺激都能促进TBK1的表达。通过检测TBK1转录起始位点上游的875bp核苷酸序列，发现一些已知转录因子的结合序列和位点。通过构建报告基因载体，转染到CHSE-214细胞中，结果发现启动子和一些顺式作用因子分布在离转录起始位点-875bp到-425bp和-245到+28bp区域。NF-κB是一个重要的细胞免疫应答基础调节因子，控制着很多的转录相关基因家族，如c-Jun, STATs, GATAs, T-Box.等等，NF-κB往往是第一个应对细胞刺激产生免疫应答的细胞因子。NRF基因是NF-κB的一个抑制因子，由3397bp个核苷酸序列组成，包含2394bp核苷酸长度的开放阅读框编码797个氨基酸序列，NRF蛋白含有一个G-patch结构域和R3H功能结构域，这两个结构域序列非常的保守。通过对NRF亚细胞定位分析，载体转染到细胞48h后，NRF蛋白向细胞核靠近或进入细胞核中，我们推测NRF在细胞核中执行其功能。Eomes是T-bet在CD8T细胞中旁系同源基因，是T-box家族中的一员。报道称Eomes是CD8T细胞分化重要的调节因子。本研究中，我们克隆鉴定了Eomes的全基因序列(2618bp)，并对其启动子区域进行了分析。在Eomes的上游区域，含有NF-E2, S8，GATA-1/2，HSF2,和Ets-1.转录因子的结合位点，启动区域报告基因载体分析，Eomes的启动区域主要分布在-694到-376。qRT-PCR分析，Eomes在组织中的分布广泛，在脾脏和前肾中的表达量最高。GATA-3是CD4+原代细胞向Th2细胞分化的关键的转录因子。大西洋鳕鱼的GATA-3基因由1320bp核苷酸开放阅读框，编码440个氨基酸组成。拥有两个高度保守的锌指结构，我们还克隆得到了一个没有锌指结构的GATA-3的剪切体，这个剪切体由828bp核苷酸组成的开放阅读框，编码276个氨基酸组成。将GATA-3和它的剪切体构建带有红色荧光蛋白的表达质粒转染到CHSE-214细胞中，48小时后发现两种蛋白都在靠近或进入到细胞核中。将两个基因构建表达质粒，将其跟GATA-3报告基因载体同时转染到细胞中，发现GATA-3能够促进报告基因表达而GATA-3剪切体则不能，GATA-3剪切体也没有干扰到全长GATA-3基因的功能。实时定量PCR检测结果显示，两种GATA-3基因都在鳃上有较高的表达，意外地是PMA刺激的原代前肾细胞，GATA-3剪切体有超过10万倍的表达。PolyI:C和β-glucan抑制了GATA-3剪切体的表达。Foxp3是T细胞特异性的转录因子，当机体受到外界刺激后免疫调节的过程中，对Treg细胞分化起着关键作用，我们克隆鉴定了大西洋鳕鱼Foxp3基因的全长cDNA核苷酸序列,在其编码的蛋白质中含有一个Forkhead结构域,一个C2H2锌指结构域和一个leucine-zipper结构域，大西洋鳕鱼Foxp3基因在鳃中的表达量最高。此外我们克隆了Foxp3上游1615bp的核苷酸序列，发现了一些已知的转录因子的结合位点，通过构建报告基因载体，转染到CHSE-214细胞中，结果发现启动子及一些顺式作用因子分布-400bp到TSS。对牙鲆免疫球蛋白的研究中，应用单克隆抗体、组织学、免疫细胞化学、免疫组织化学和流式细胞术对牙鲆外周血、肾脏、肝胰脏、肠道、脾脏组织中Ig+细胞进行了定位和数量评估。结果表明，在以上免疫相关组织中均发现Ig+细胞。应用丙酮固定的外周血细胞，免疫细胞化学指示的主要是细胞质中Ig阳性的细胞；脾脏中Ig+细胞一般成簇分布于黑色素巨噬细胞中心和血管周围；在前肾和后肾中也都观察到了Ig+细胞，单个或成簇存在于血管周围；肝胰脏中的Ig+细胞主要存在于肝组织中，单个存在且没有规律性，胰组织中没有发现Ig+细胞；肠道作为重要的粘液免疫器官，Ig+细胞主要分布在固有层中，也有成簇存在现象，在上皮层可见到单个存在Ig+细胞。流式细胞术结果表明，抗体阳性细胞含量比例最大的是外周血细胞，其次是脾、前肾、肝脏和肠道。