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目的近年来我国乳腺癌（breast cancer）发病率逐年上升，成为威胁女性健康的主要恶性肿瘤。随着医疗水平的升高，虽然乳腺癌的生存期延长，但是乳腺癌治疗之后的转移和复发成为治疗乳腺癌的难题。乳腺细胞表达多种激素受体，如雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)、泌乳素受体、雄激素受体等。乳腺细胞生长受多种激素的调控，雌激素是影响乳腺癌发展的主要激素。当乳腺癌细胞保留全部或大部分受体时，其生长受激素调节明显，称为激素依赖型乳腺癌；当乳腺癌细胞只保留极少受体或受体缺失时，其生长不受激素影响，称为激素非依赖型乳腺癌。雌激素受体阳性乳腺癌在激素治疗后，常会出现雌激素抵抗，这是目前治疗雌激素受体阳性型乳腺癌难以解决的问题。白藜芦醇（Resveratrol,Res）是一种从植物中提取的天然多酚类化合物，具有多方面的生物学作用，实验已经证实的主要作用包括保护心脑血管、降低血脂、减少女性骨质疏松、抗肿瘤等。白藜芦醇的抗肿瘤作用近几年越来越受到人们的关注。实验证明白藜芦醇可以在肿瘤发生、发展的多个阶段抑制肿瘤，包括肿瘤细胞周期、增殖、迁移等。同时白藜芦醇的化学结构与人工合成雌激素己烯雌酚极为相似，具有雌激素样作用。已有实验证实在雌激素含量高低不同的小鼠体内，白藜芦醇可以发挥截然不同的雌激素作用或抗雌激素样作用。本研究主要探讨白藜芦醇对雌激素受体表达不同的乳腺癌细胞的抑制作用，包括对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响，探讨白藜芦醇用于治疗乳腺癌的机制和可能性。方法和结果1.白藜芦醇对乳腺癌细胞增殖的影响1.1MTT法检测白藜芦醇对乳腺癌细胞DU4475、MDA-MB-231、MCF-7增殖的影响DU4475、MDA-MB–231、MCF–7细胞分别接种于96孔板中，每个处理组三复孔，用终浓度不同的白藜芦醇作用细胞24h、48h、72h，用MTT法检测细胞的增殖状况。结果显示，随着药物浓度增加和作用时间延长，细胞的存活率明显下降。Res对DU4475、MDA-MB-231细胞的抑制率较MCF-7细胞高。1.2流式细胞术检测白藜芦醇对DU4475、MDA-MB-231、MCF-7细胞周期的影响细胞经12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L白藜芦醇作用48小时后，用PI标记DNA，流式细胞术检测细胞周期。三种细胞的细胞周期均有明显改变：与对照组相比，各浓度均使细胞在S期发生阻滞。在三种浓度白藜芦醇作用下，ER阳性的MCF-7细胞阻滞于S期的比例较ER阴性的两种细胞低。ICI182,780对MDA-MB-231周期没有影响，也不能干扰Res对细胞的周期作用；ICI182,780使MCF-7细胞堆积在G0/G1期，但这种作用在ICI182,780与Res合用时被干扰，合用使MCF-7细胞在S期发生阻滞。1.3流式细胞术检测白藜芦醇对DU4475、MDA-MB-231、MCF-7细胞凋亡的影响12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L白藜芦醇作用于DU4475、MDA-MB-231和MCF-7细胞48小时，用流式细胞术检测细胞凋亡率。随Res浓度升高两种细胞的活细胞比例均减少，凋亡细胞数逐渐增高。DU4475加药组的凋亡率最高可达37.41%，MDA-MB-231加药组的凋亡率最高可达39.69%，MCF-7加药组的凋亡率最高仅为21.81%。当Res浓度为50μmol/L时，DU4475、MDA-MB-231细胞的凋亡率高于MCF-7细胞。2.白藜芦醇对乳腺癌细胞增殖相关蛋白AKT、caspase-3的影响将MDA-MB-231和MCF-7细胞用终浓度为0、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L白藜芦醇培养48h，收集细胞，提取蛋白，用western blot检测AKT磷酸化、caspase-3活化的情况。实验结果表明，随着药物浓度升高，细胞的p-AKT表达量均逐渐降低，caspase-3活化均增多，cleaved-caspase-3表达增加。3.白藜芦醇对MDA-MB-231、MCF-7细胞迁移的影响和对MDA-MB-231侵袭的影响3.1细胞划痕实验检测白藜芦醇对MDA-MB-231、MCF-7细胞迁移能力的影响细胞经过12.5μmol/L、50μmol/L、75μmol/L的白藜芦醇作用24h，细胞运动迁移能力下降。与对照组比较，加药组细胞迁移被抑制，划痕间隙比对照组大，并且药物浓度越大划痕间隙越大。3.2Transwell法检测白藜芦醇对MDA-MB-231、MCF-7细胞迁移的影响用Transwell小室法检测不同浓度Res对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果表明，作用48h细胞的迁移率较对照组降低，MDA-MB-231、MCF-7穿过微孔膜的细胞数减少。并且随药物浓度增加，细胞迁移率逐渐降低。Res作用下，MDA-MB-231细胞迁移率低于MCF-7细胞。3.3Transwell法检测白藜芦醇对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响在transwell小室上层铺上基质胶，检测25μmol/L Res作用48h对MDA-MB-231细胞侵袭的影响。加药组MDA-MB-231细胞穿过基质胶粘附于下层膜的细胞数较对照组减少。3.4RT-PCR检测白藜芦醇作用后MDA-MB-231、MCF-7细胞MMP-2、MMP-9的表达12.5μmol/L、50μmol/L的白藜芦醇作用MDA-MB-231、MCF-7细胞48h小时，收集细胞提取细胞总mRNA，用RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达量的改变，结果显示两种细胞MMP-2、MMP-9的mRNA表达量均减少，且随浓度升高而降低。结论本研究探讨了白藜芦醇作为一种抗肿瘤药物，抑制乳腺癌增殖、促进细胞凋亡、抑制乳腺癌转移的相关机制。研究结果表明，白藜芦醇可以抑制雌激素受体表达不同的多种乳腺癌细胞的增殖，阻滞细胞的增殖周期，促进细胞凋亡。在抑制细胞增殖方面ER阴性细胞较ER阳性细胞对白藜芦醇更敏感。在抑制乳腺癌转移方面，白藜芦醇对于MCF-7和MDA-MB-231细胞均有明显的作用。